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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 【求助/交流】如何筛选酸性蛋白酶高产菌株，制定筛选方案
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江苏虞游

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】如何筛选酸性蛋白酶高产菌株，制定筛选方案

如何筛选酸性蛋白酶高产菌株，制定筛选方案
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1楼 2011-04-07 14:24:41
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liuyuetq

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
江苏虞游(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+2, EPI+1): 鼓励交流~~~ 2011-04-14 17:21:40
我认为具体筛选的流程可以如下：
1从土壤中取样，因为筛选的菌种产的蛋白酶为酸性可以从果园，花瓣散落出取样，我曾经筛过产蛋白酶的枯草芽孢杆菌所以下一步进行富集筛选菌，我进行的是煮沸处理，芽孢菌致死温度至少应在121℃，所以可以初步杀死其他菌。
2取处理过液体进行适当稀释，涂布于有酪素的平板，在最适温度下进行培养，选取透明圈与菌体直径比大的，转至完全培养基培养。
3将此菌进行复发酵，测其酶活。
请问楼主所说的酸性蛋白酶要求耐酸，若培养基中直接制成酸性条件可能长出的菌是耐酸的而蛋白酶不耐酸，所以应先让菌体长起，然后在培养基中在涂布酸性的酪素平板挑选透明圈直径比大的
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5楼2011-04-14 11:57:49
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802311820

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
江苏虞游(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+2): 鼓励交流~~~ 2011-04-07 15:25:22
江苏虞游(金币+1): 2011-04-09 17:49:33
先查找文献，看看有哪些菌种可以产酸性蛋白酶（好像曲霉属的菌种可以产，黑曲霉、米曲霉等），然后搜集相关菌种，或自己分离或到直接购买，然后筛选合适菌株，再进行培养条件优化，使之产量最大化。
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2楼2011-04-07 14:46:01
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江苏虞游

木虫 (正式写手)
我先在需要的是具体的筛选方案…………至于是何种菌株没限制要求
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3楼2011-04-08 12:01:35
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802311820

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
江苏虞游(金币+2): 2011-04-11 18:54:03
rainwander(金币+3): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-04-11 20:05:06
自然界中蕴藏着丰富的微生物资源，为了按照人类的需要利用微生物菌种资源，就需要有目的的进行微生物菌种筛选。一般来讲微生物菌种筛选对象有两种：一种是从自然界（包括土壤、水体等自然环境；还包括泡菜、堆肥等人为创造的环境）中进行菌种筛选，这与菌种分离纯化密不可分；另一种是从已经获得的微生物纯菌种中进行筛选，比如从菌种保藏机构保藏的菌种中进行筛选。两种微生物菌种筛选各有利弊，第一种筛选中是从复杂的微生物菌群中获得目的菌种，因此涉及菌种分离纯化及后期菌种鉴定等工作；但是由于是分离对象是复合菌群，因此筛选获得目的菌种的可能性也较大。第二种微生物菌种筛选由于是从多个微生物纯菌种中筛选，因此不必进行分离纯化，但是需要对目的菌种有所了解
，比如产甘露聚糖酶的菌种有细菌的芽孢杆菌及霉菌的曲霉等，这就需要确定想要获得的目的菌种是哪一类，进而对该类微生物菌种进行筛选。
   当然了，以上筛选只是获得初步的菌种，要想提高菌种性能，需要对菌种进行选育。微生物菌种筛选也应用于微生物菌种选育过程中。
   微生物菌种筛选首先需要确定筛选目的，也就是要获得什么样的菌种，是产某种酶的呢？还是产某种物质？还是具有特定适应性呢（如耐高温）？
   然后就是确定检测目的菌种的方法，也就是菌种筛选方法，比如筛选产蛋白酶的菌种可以用透明圈法等。
常用的菌种筛选方法有：
   透明圈法 在固体培养基中渗入溶解性差、可被特定菌利用的营养成分，造成浑浊、不透明的培养基背景，有时需要特定染色液染色。具有对应功能的菌落周围就会形成透明圈，透明圈的大小反映了菌落利用此物质的能力。比如在培养基中掺入可溶性淀粉、酪素或CaCO3可以分别用于检测菌株产淀粉酶、产蛋白酶或产酸能力的大小。
   生长圈法 利用一些有特别营养要求的微生物作为工具菌，若待分离的菌在缺乏上述营养物的条件下，能合成该营养物，或能分泌酶将该营养物的前体转化成营养物，那么，在这些菌的周围就会有工具菌生长，形成环绕菌落生长的生长圈。 该法常用来选育氨基酸、核苷酸和维生素的生产菌。工具菌往往都是对应的营养缺陷型菌株。
   抑制圈法 抑菌圈法与生长圈法正好相反。待筛选的菌株能分泌产生某些能抑制工具菌生长的物质，或能分泌某种酶并将无毒的物质水解成对工具菌有毒的物质，从而在该菌落周围形成工具菌不能生长的抑菌圈。例如：将培养后的单菌落连同周围的小块琼脂用穿孔器取出，以避免其它因素干扰，移入无培养基平皿，继续培养4-5天，使抑制物积累，此时的抑制物难以渗透到其它地方，再将其移入涂布有工具菌的平板，每个琼脂块中心间隔距离为2厘米，培养过夜后，即会出现抑菌圈。抑菌圈的大小反映了琼脂块中积累的抑制物的浓度高低。该法常用于抗生素产生菌的筛选，工具菌常是抗生素敏感菌。
   以上三种方法都是较为简便的菌种筛选方法。对于一些产特定物质菌种的筛选，有时需要借助液相或分光光度法检测了。而且这些方法检测室定量的，在菌种选育过程中也常用，有助于筛选高产菌株。

以上文字来源于网络，非原创，感觉说的挺好，特此搬来，希望对您有帮助。
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4楼2011-04-11 15:06:30
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