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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】有没有人用Luminex 200 测过mRNA的表达量？
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足下客

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】有没有人用Luminex 200 测过mRNA的表达量？

求用Luminex 200 测mRNA表达量的技术资料，要尽可能详细的操作步骤，不是产品说明书
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1楼2011-04-06 09:50:34
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
足下客(金币+1): 谢谢你的参与 2011-04-06 13:41:04
1949stone(金币+4): 鼓励 2011-04-06 14:03:11
足下客(金币+1): 2011-06-29 17:14:23
1、分不同的组织加入不同的裂解液（不需要抽提RNA）
2、加入杂交探针过夜杂交（同一样本多个基因检测的探针在一起）
3、洗涤未杂交上的多余探针，放入信号放大探针杂交，洗涤，加入标记探针杂交，洗涤，加入荧光染料，洗涤。
4、加入度数Buffer杂交5分钟，上机读数。
5、仪器自动给出代表基因表达量倍比关系的荧光值结果。
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2楼2011-04-06 12:53:59
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足下客

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2011-04-06 12:53:59:
1、分不同的组织加入不同的裂解液（不需要抽提RNA）
2、加入杂交探针过夜杂交（同一样本多个基因检测的探针在一起）
3、洗涤未杂交上的多余探针，放入信号放大探针杂交，洗涤，加入标记探针杂交，洗涤，加入荧光 ...

最后一步给出倍比关系，应该是有个参照的吧，就是文献中说的内标。不知道这个内标是如何选取的呢，用的是什么组织中的RNA呢？还有这个内标的浓度是如何控制的，需不需要做标准曲线之类的呢？
再就是做内标用的RNA与待测的RNA是放在同一个孔中检测，还是不同的孔中检测？
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3楼2011-04-06 13:39:31
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+6): good 2011-04-06 15:04:10
足下客(金币+5): 非常感谢，明白多了 2011-04-06 15:13:53
足下客(金币+1): 2011-06-29 17:14:30
引用回帖:
Originally posted by 足下客 at 2011-04-06 13:39:31:
最后一步给出倍比关系，应该是有个参照的吧，就是文献中说的内标。不知道这个内标是如何选取的呢，用的是什么组织中的RNA呢？还有这个内标的浓度是如何控制的，需不需要做标准曲线之类的呢？
再就是做内标用的 ...

这个技术是和QPCR完全不同的原理的，也有内参基因，说明书上给出了很多个表达登记的内参基因，如果要做绝对定量那肯定是要做标曲的，但大家通常在做QPCR的时候做的是相对定量。这种技术是把不同基因的探针（包括看家基因的探针）放在一个样本里来进行杂交的。所以最后数据统计的时候先把不同样本之中的看家基因统一了，然后再在每一个样本当中不同基因和看家基因再计算一个相对表达量的值，所以不做标曲就做的是相对定量。
做QPCR只有做病毒的是会做绝对定量的，其他做的基本都是相对定量。
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4楼2011-04-06 14:12:15
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足下客

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2011-04-06 12:53:59:
1、分不同的组织加入不同的裂解液（不需要抽提RNA）
2、加入杂交探针过夜杂交（同一样本多个基因检测的探针在一起）
3、洗涤未杂交上的多余探针，放入信号放大探针杂交，洗涤，加入标记探针杂交，洗涤，加入荧光 ...

我想再问个问题，取组织样本的时候怎样才能保证取到得样本量是一致的呢？那么多的组织样本中本身含的待测RNA量应该有很大的区别吧，这样的话，测出来的数值还有可比性吗？
我现在准备学习用LUMINEX 测mRNA的实验技术，很多地方都不懂，还要多多请教你
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5楼2011-04-12 10:51:25
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
足下客(金币+2): 2011-07-01 11:19:05
西瓜(金币+5, EPI+1): 很热心，连之前一并奖励了 2011-07-01 12:42:18
引用回帖:
Originally posted by 足下客 at 2011-04-12 10:51:25:
我想再问个问题，取组织样本的时候怎样才能保证取到得样本量是一致的呢？那么多的组织样本中本身含的待测RNA量应该有很大的区别吧，这样的话，测出来的数值还有可比性吗？
我现在准备学习用LUMINEX 测mRNA的实 ...

如果选择液相芯片的技术不需要取样一致，多基因检测的时候如果取样不一致各个样本中的看家基因也不一致了，可以通过调整看家基因来把样本调整成一致的结果，所以没有前期加样时那么严格的一致要求，但RealTime就不行了。
呵呵，不知道我解释清楚了没。
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6楼2011-07-01 09:49:35
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gasolineoo

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
您好，
看到你们谈论lunimex200，我想请问一下该仪器可不可以测自己合成的微球，荧光染料可能与试剂盒不一样。
期待您的回复，谢谢
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7楼2011-07-15 09:33:23
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足下客

木虫 (正式写手)
★
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-07-15 23:31:36
引用回帖:
Originally posted by gasolineoo at 2011-07-15 09:33:23:
您好，
看到你们谈论lunimex200，我想请问一下该仪器可不可以测自己合成的微球，荧光染料可能与试剂盒不一样。
期待您的回复，谢谢

不知道你们是用什么荧光编码的，理论上荧光的激发和吸收波长在仪器的范围内，都是可以测的。具体你应该咨询 一下Luminex公司或代理Luminex公司（如密理博）的技术支持人员。
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gasolineoo
8楼2011-07-15 12:47:06
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gasolineoo

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
引用回帖:
Originally posted by 足下客 at 2011-07-15 12:47:06:
不知道你们是用什么荧光编码的，理论上荧光的激发和吸收波长在仪器的范围内，都是可以测的。具体你应该咨询 一下Luminex公司或代理Luminex公司（如密理博）的技术支持人员。

谢谢您，那我再咨询一下公司。
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9楼2011-07-16 09:26:45
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