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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 【求助/交流】DNA测序问题
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liulanhua

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】DNA测序问题

重组的质粒进行双酶切，发现有个酶切位点切不开。我想确认一下重组质粒是否发生突变，是不是需要进行DNA测序？是整个质粒都测还是可以测某一个片段啊？
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1楼2011-04-04 15:28:27
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liulanhua

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wolfebst at 2011-04-05 18:02:01:
是否甲基化了，才切不开的？还是你试验的时候酶切条件和时间没掌握好？
根据质粒序列设计引物测序就好吧，不用全测

试了好几个条件 也重复了 都不行 准备测序看看
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9楼2011-04-05 19:38:25
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
这个得看一下酶切位点的位置吧！
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2楼2011-04-04 18:34:00
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liulanhua

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by blackrose8089 at 2011-04-04 18:34:00:
这个得看一下酶切位点的位置吧！

没明白什么意思?质粒里应该有BamHI酶切位点，但用这个酶怎么都切不开。就想测下序，看是否发生突变而导致这个位点没了。
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3楼2011-04-05 11:16:35
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郝钊

金虫 (小有名气)
liulanhua(金币+1): 2011-04-05 11:27:02
在目的基因两边设计引物，PCR产物拿去测序，看酶切位点处是否突变掉了就可以。
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4楼2011-04-05 11:20:09
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