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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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liulanhua

金虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】DNA测序问题

重组的质粒进行双酶切,发现有个酶切位点切不开。我想确认一下重组质粒是否发生突变,是不是需要进行DNA测序?是整个质粒都测还是可以测某一个片段啊?
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这个得看一下酶切位点的位置吧!
2楼2011-04-04 18:34:00
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liulanhua

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by blackrose8089 at 2011-04-04 18:34:00:
这个得看一下酶切位点的位置吧!

没明白什么意思?质粒里应该有BamHI酶切位点,但用这个酶怎么都切不开。就想测下序,看是否发生突变而导致这个位点没了。
3楼2011-04-05 11:16:35
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郝钊

金虫 (小有名气)


liulanhua(金币+1): 2011-04-05 11:27:02
在目的基因两边设计引物,PCR产物拿去测序,看酶切位点处是否突变掉了就可以。
4楼2011-04-05 11:20:09
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liulanhua

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by 郝钊 at 2011-04-05 11:20:09:
在目的基因两边设计引物,PCR产物拿去测序,看酶切位点处是否突变掉了就可以。

必须还的设计引物啊?我不是学生物的,这对我来说好难啊!直接拿质粒去测序的话行吗?是不是很贵?
5楼2011-04-05 11:28:27
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郝钊

金虫 (小有名气)


★ ★
liulanhua(金币+1): 2011-04-05 15:10:23
rainwander(金币+2): 鼓励交流~~~ 2011-04-05 19:17:10
那就让公司给你设计引物吧,你只要把质粒和部分序列给他们就可以了。不用整个质粒都测序,只把你要的那一部分测一下就可以了。一个反应二三十块钱,不贵,可以测七八百个碱基。
6楼2011-04-05 12:46:59
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liulanhua

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by 郝钊 at 2011-04-05 12:46:59:
那就让公司给你设计引物吧,你只要把质粒和部分序列给他们就可以了。不用整个质粒都测序,只把你要的那一部分测一下就可以了。一个反应二三十块钱,不贵,可以测七八百个碱基。

谢啦!
7楼2011-04-05 15:10:12
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★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
rainwander(金币+1): 鼓励交流~~~ 2011-04-05 19:17:22
是否甲基化了,才切不开的?还是你试验的时候酶切条件和时间没掌握好?
根据质粒序列设计引物测序就好吧,不用全测
8楼2011-04-05 18:02:01
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liulanhua

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by wolfebst at 2011-04-05 18:02:01:
是否甲基化了,才切不开的?还是你试验的时候酶切条件和时间没掌握好?
根据质粒序列设计引物测序就好吧,不用全测

试了好几个条件 也重复了 都不行 准备测序看看
9楼2011-04-05 19:38:25
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wuwu3660

铁虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你看一下质粒图谱是不是有通用的测序引物,或者你告诉测序的公司你质粒的名称,他们知道是不是有通用测序引物,如果有直接送去就可以了
10楼2011-04-06 17:15:25
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liulanhua

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by wuwu3660 at 2011-04-06 17:15:25:
你看一下质粒图谱是不是有通用的测序引物,或者你告诉测序的公司你质粒的名称,他们知道是不是有通用测序引物,如果有直接送去就可以了

恩 已经跟测序公司联系了,谢谢指点
11楼2011-04-07 08:12:06
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wazlf

银虫 (正式写手)


★ ★
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rainwander(金币+1): 鼓励交流~ 2011-04-18 13:26:50
查一下你的质粒是哪个型号的,就可以查大你的质粒的基因序列,然后再根据目的基因购买酶,测序不一定能解决根本问题!
12楼2011-04-13 10:56:41
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liulanhua

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by wazlf at 2011-04-13 10:56:41:
查一下你的质粒是哪个型号的,就可以查大你的质粒的基因序列,然后再根据目的基因购买酶,测序不一定能解决根本问题!

没明白什么意思?我的质粒的基因序列是知道的,目的基因也知道,都是从基因库里查到的。
13楼2011-04-18 10:59:50
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liulanhua

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by 郝钊 at 2011-04-05 12:46:59:
那就让公司给你设计引物吧,你只要把质粒和部分序列给他们就可以了。不用整个质粒都测序,只把你要的那一部分测一下就可以了。一个反应二三十块钱,不贵,可以测七八百个碱基。

今天拿到测序结果了,不知道怎么分析,看大家说的什么在NCBI上进行比对,我的只是想看序基因序列有没有突变,该怎么看啊?请高手指点一下。多谢!
14楼2011-04-18 11:01:49
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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
把你的序列打开,搜索酶的位点,如果还在,那就没有突变,如果不在,那就默哀呗,记得双链都要搜索,才好确认。
15楼2011-04-18 16:11:24
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suenmomo

金虫 (小有名气)


质粒上的酶切位点基本不会发生突变的啊!
应该是甲基化或者其他问题
测序你直接把质粒给公司就可以了
16楼2011-04-19 11:29:53
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