【求助/交流】pET29a转化E.coli BL21 - 分子生物 - 综合其他

版块导航: 正在加载中...

客户端APP下载

论文辅导

申博辅导

登录注册

应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜

返回列表

本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

★ ★
1949stone(金币+2, EPI+1): 鼓励 2011-04-03 13:04:29

DH5α有DNA酶缺陷，适合用于克隆（质粒DNA不容易被干掉，可以过量复制），BL21貌似是有蛋白酶缺陷，适合用于表达。

酶切、连接之后，不能保证片段一定连上去，所以需要一个验证的过程，这就需要提质粒。所以先把连接产物转化到DH5α，挑选单菌落，然后验证。

就是说，如果你需要把外源片段插入质粒里，那在酶切、连接之后，先把重组质粒转化到DH5α里面，然后筛选转化子（例如，提质粒后酶切验证、PCR验证等等）；筛选到含有正确的重组质粒的转化子后，再摇菌，把重组质粒提出来，转化到BL21里面，用于诱导表达蛋白质。

下面是抄来的，我自己也没全看懂……
1：DH5α菌株
DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。

基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1

2：BL21(DE3) 菌株

该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。

基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3）

赞一下(2人)

回复此楼

2楼2011-04-03 12:52:30

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

智能机器人

Robot (super robot)

我们都爱小木虫

找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~

bl21超声破壁问题已经有4人回复
E.coli离心离不下来已经有8人回复
P-E曲线和C-V曲线是一样的吗？？有什么不同？已经有3人回复
渗透冲击法裂解诱导后的E.coli BL21(DE3)，提纯HIS-tag蛋白，求指导已经有12人回复
【求助/交流】提取大肠杆菌中异源表达的蛋白用什么方法已经有6人回复
【求助/交流】在线等：E.coli BL21 转化子在kan平板上要长多久已经有8人回复
Physica E 审稿两个多月，要不要催稿？已经有4人回复
【求助/交流】E.coli K-12 已经有7人回复
【求助/交流】大肠杆菌BL21的问题已经有4人回复

点击这里搜索更多相关资源

科研从小木虫开始，人人为我，我为人人

相关版块跳转我要订阅楼主 xiaoyu1014126 的主题更新

返回列表