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songzhikui

铁虫 (初入文坛)


[交流] 【求助/交流】纳豆激酶制备过程中蛋白含量测定结果令我很费解,希望各位大虾多多指教�

我是通过液体发酵制备而得的样品,离心得到上清后,硫酸铵盐析样品得到沉淀蛋白,透析后冷冻干燥得到蛋白样品,采用考马斯亮蓝染色法测得蛋白含量都为8-10%左右,那其余90%是什么呢?令我很费解,之后我以为方法上是不是误差太大,采用BCA试剂盒来测蛋白含量,同时测定试剂盒所带的BSA(2mg/ml)标准品,根据标曲算的我bsa蛋白浓度为1.9701mg/ml,相差不是很大,而我的纳豆激酶样品所测结果仍然为8-10%之间希望各位大虾给给意见,谢谢了!!!
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songzhikui

铁虫 (初入文坛)


自己先顶起,别沉了
2楼2011-03-22 10:33:57
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songzhikui

铁虫 (初入文坛)


在线等回复
3楼2011-03-22 10:54:53
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songzhikui

铁虫 (初入文坛)


4楼2011-03-22 16:42:14
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henkally

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

5楼2011-03-22 17:03:39
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henkally

禁虫 (著名写手)

★ ★
silicare(金币+2): 问题提的好,同问 2011-03-22 18:47:56
本帖内容被屏蔽

6楼2011-03-22 17:07:46
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songzhikui

铁虫 (初入文坛)


不好意思,怪我没说清楚
是这样的:我之前采用考马斯亮蓝蛋白试剂盒测我所得的蛋白样本,一共有10批样本,通过bsa标曲计算所得的蛋白量占样品总重的8~10%.但是那其余的90%是什么呢?按理说硫酸铵盐析大部分蛋白都下来了吧,但是为什么那么低呢?

我当时觉得是不是方法有问题,用BCA法莱印证一下,这也是我为什么要测BCA试剂盒里面附带的BSA蛋白浓度的原因。

可是那90%我怎么想也想不出,它到底是啥

谢谢各位老师和同学了。哪怕给那么一小点的指引我都感激不尽,真的
谢谢
7楼2011-03-23 10:34:58
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songzhikui

铁虫 (初入文坛)


顶起!~别沉了
8楼2011-03-24 17:25:24
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songzhikui

铁虫 (初入文坛)


没人理我,顶
9楼2011-03-27 09:54:13
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songzhikui

铁虫 (初入文坛)


等待中···
10楼2011-03-28 15:16:37
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songzhikui

铁虫 (初入文坛)


等待中·····
11楼2011-03-28 15:17:07
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dongchao

金虫 (小有名气)


★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
是纳豆发酵过程中产生的多聚谷氨酸,即PGA。我的信箱:dongchao8605@sina.com。我一直在做纳豆激酶方面的工作,可以联系。
12楼2011-05-30 09:38:26
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conroc

金虫 (正式写手)


★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
1楼: Originally posted by songzhikui at 2011-03-22 10:15:17:
我是通过液体发酵制备而得的样品,离心得到上清后,硫酸铵盐析样品得到沉淀蛋白,透析后冷冻干燥得到蛋白样品,采用考马斯亮蓝染色法测得蛋白含量都为8-10%左右,那其余90%是什么呢?令我很费解,之后我以为方法上 ...

很是有感触,最近用考马斯和lowery法分别测了下 蛋白含量,都会有这个问题,测定的蛋白含量偏低,我们的菌也是联产聚谷氨酸的,我猜测有可能是这个原因,我是做纳豆激酶的分离纯化的,在最后纯化后,蛋白含量很低,不能用冷冻干燥称重量,只能选择用考马斯或lowery法测定,很是无语,测的少了吧,比活太高,老板说不可信。我又用纳豆激酶表品,在日本viko公司买的,做表品,测出来蛋白含量很高,结果比活太小,老板说,要是这样,你纯化了,没意义。我很是无语。。。我猜原因应该是纳豆激酶和G250结合不紧密,所以不容易测量。。。。
13楼2011-09-22 15:49:57
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minjuntao

新虫 (初入文坛)


你的 提法只是粗酶!
14楼2012-03-29 14:32:38
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mecano

新虫 (初入文坛)


★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这个帖子很好啊!应该有更多人来参与讨论啊,不要沉了啊!!
15楼2012-08-30 11:25:50
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