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songzhikui

铁虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】纳豆激酶制备过程中蛋白含量测定结果令我很费解，希望各位大虾多多指教�

我是通过液体发酵制备而得的样品，离心得到上清后，硫酸铵盐析样品得到沉淀蛋白，透析后冷冻干燥得到蛋白样品，采用考马斯亮蓝染色法测得蛋白含量都为8-10%左右，那其余90%是什么呢?令我很费解，之后我以为方法上是不是误差太大，采用BCA试剂盒来测蛋白含量，同时测定试剂盒所带的BSA（2mg/ml）标准品，根据标曲算的我bsa蛋白浓度为1.9701mg/ml，相差不是很大，而我的纳豆激酶样品所测结果仍然为8-10%之间希望各位大虾给给意见，谢谢了！！！

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1楼 2011-03-22 10:15:17

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songzhikui

铁虫 (初入文坛)

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自己先顶起，别沉了

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2楼2011-03-22 10:33:57

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songzhikui

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3楼2011-03-22 10:54:53

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songzhikui

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4楼2011-03-22 16:42:14

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henkally

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5楼2011-03-22 17:03:39

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henkally

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★ ★
silicare(金币+2): 问题提的好，同问 2011-03-22 18:47:56

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6楼2011-03-22 17:07:46

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songzhikui

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不好意思，怪我没说清楚
是这样的：我之前采用考马斯亮蓝蛋白试剂盒测我所得的蛋白样本，一共有10批样本，通过bsa标曲计算所得的蛋白量占样品总重的8~10%.但是那其余的90%是什么呢？按理说硫酸铵盐析大部分蛋白都下来了吧，但是为什么那么低呢？

我当时觉得是不是方法有问题，用BCA法莱印证一下，这也是我为什么要测BCA试剂盒里面附带的BSA蛋白浓度的原因。

可是那90%我怎么想也想不出，它到底是啥

谢谢各位老师和同学了。哪怕给那么一小点的指引我都感激不尽，真的
谢谢

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7楼2011-03-23 10:34:58

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songzhikui

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顶起！~别沉了

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8楼2011-03-24 17:25:24

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songzhikui

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没人理我，顶

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9楼2011-03-27 09:54:13

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songzhikui

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10楼2011-03-28 15:16:37

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songzhikui

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11楼2011-03-28 15:17:07

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dongchao

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★
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是纳豆发酵过程中产生的多聚谷氨酸,即PGA。我的信箱：dongchao8605@sina.com。我一直在做纳豆激酶方面的工作，可以联系。

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12楼2011-05-30 09:38:26

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conroc

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★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

1楼: Originally posted by songzhikui at 2011-03-22 10:15:17:
我是通过液体发酵制备而得的样品，离心得到上清后，硫酸铵盐析样品得到沉淀蛋白，透析后冷冻干燥得到蛋白样品，采用考马斯亮蓝染色法测得蛋白含量都为8-10%左右，那其余90%是什么呢?令我很费解，之后我以为方法上 ...

很是有感触，最近用考马斯和lowery法分别测了下蛋白含量，都会有这个问题，测定的蛋白含量偏低，我们的菌也是联产聚谷氨酸的，我猜测有可能是这个原因，我是做纳豆激酶的分离纯化的，在最后纯化后，蛋白含量很低，不能用冷冻干燥称重量，只能选择用考马斯或lowery法测定，很是无语，测的少了吧，比活太高，老板说不可信。我又用纳豆激酶表品，在日本viko公司买的，做表品，测出来蛋白含量很高，结果比活太小，老板说，要是这样，你纯化了，没意义。我很是无语。。。我猜原因应该是纳豆激酶和G250结合不紧密，所以不容易测量。。。。

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13楼2011-09-22 15:49:57

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