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songzhikui

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 20.2
帖子: 15
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虫号: 254037

[交流] 【求助/交流】纳豆激酶制备过程中蛋白含量测定结果令我很费解，希望各位大虾多多指教�

我是通过液体发酵制备而得的样品，离心得到上清后，硫酸铵盐析样品得到沉淀蛋白，透析后冷冻干燥得到蛋白样品，采用考马斯亮蓝染色法测得蛋白含量都为8-10%左右，那其余90%是什么呢?令我很费解，之后我以为方法上是不是误差太大，采用BCA试剂盒来测蛋白含量，同时测定试剂盒所带的BSA（2mg/ml）标准品，根据标曲算的我bsa蛋白浓度为1.9701mg/ml，相差不是很大，而我的纳豆激酶样品所测结果仍然为8-10%之间希望各位大虾给给意见，谢谢了！！！

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1楼 2011-03-22 10:15:17

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conroc

金虫 (正式写手)

应助: 33 (小学生)
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虫号: 1078186

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引用回帖:

1楼: Originally posted by songzhikui at 2011-03-22 10:15:17:
我是通过液体发酵制备而得的样品，离心得到上清后，硫酸铵盐析样品得到沉淀蛋白，透析后冷冻干燥得到蛋白样品，采用考马斯亮蓝染色法测得蛋白含量都为8-10%左右，那其余90%是什么呢?令我很费解，之后我以为方法上 ...

很是有感触，最近用考马斯和lowery法分别测了下蛋白含量，都会有这个问题，测定的蛋白含量偏低，我们的菌也是联产聚谷氨酸的，我猜测有可能是这个原因，我是做纳豆激酶的分离纯化的，在最后纯化后，蛋白含量很低，不能用冷冻干燥称重量，只能选择用考马斯或lowery法测定，很是无语，测的少了吧，比活太高，老板说不可信。我又用纳豆激酶表品，在日本viko公司买的，做表品，测出来蛋白含量很高，结果比活太小，老板说，要是这样，你纯化了，没意义。我很是无语。。。我猜原因应该是纳豆激酶和G250结合不紧密，所以不容易测量。。。。