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songzhikui

铁虫 (初入文坛)


[交流] 【求助/交流】纳豆激酶制备过程中蛋白含量测定结果令我很费解,希望各位大虾多多指教�

我是通过液体发酵制备而得的样品,离心得到上清后,硫酸铵盐析样品得到沉淀蛋白,透析后冷冻干燥得到蛋白样品,采用考马斯亮蓝染色法测得蛋白含量都为8-10%左右,那其余90%是什么呢?令我很费解,之后我以为方法上是不是误差太大,采用BCA试剂盒来测蛋白含量,同时测定试剂盒所带的BSA(2mg/ml)标准品,根据标曲算的我bsa蛋白浓度为1.9701mg/ml,相差不是很大,而我的纳豆激酶样品所测结果仍然为8-10%之间希望各位大虾给给意见,谢谢了!!!
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conroc

金虫 (正式写手)


★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
1楼: Originally posted by songzhikui at 2011-03-22 10:15:17:
我是通过液体发酵制备而得的样品,离心得到上清后,硫酸铵盐析样品得到沉淀蛋白,透析后冷冻干燥得到蛋白样品,采用考马斯亮蓝染色法测得蛋白含量都为8-10%左右,那其余90%是什么呢?令我很费解,之后我以为方法上 ...

很是有感触,最近用考马斯和lowery法分别测了下 蛋白含量,都会有这个问题,测定的蛋白含量偏低,我们的菌也是联产聚谷氨酸的,我猜测有可能是这个原因,我是做纳豆激酶的分离纯化的,在最后纯化后,蛋白含量很低,不能用冷冻干燥称重量,只能选择用考马斯或lowery法测定,很是无语,测的少了吧,比活太高,老板说不可信。我又用纳豆激酶表品,在日本viko公司买的,做表品,测出来蛋白含量很高,结果比活太小,老板说,要是这样,你纯化了,没意义。我很是无语。。。我猜原因应该是纳豆激酶和G250结合不紧密,所以不容易测量。。。。
13楼2011-09-22 15:49:57
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songzhikui

铁虫 (初入文坛)


自己先顶起,别沉了
2楼2011-03-22 10:33:57
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henkally

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

5楼2011-03-22 17:03:39
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henkally

禁虫 (著名写手)

★ ★
silicare(金币+2): 问题提的好,同问 2011-03-22 18:47:56
本帖内容被屏蔽

6楼2011-03-22 17:07:46
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