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【求助/交流】如何除去磷酸化蛋白中残余的ATP
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yanjun3830
木虫
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(幼儿园)
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虫号: 1051135
[交流]
【求助/交流】如何除去磷酸化蛋白中残余的ATP
小虫我做的课题是蛋白质磷酸化,但是目前实验需要把磷酸化蛋白中残余的ATP除去,试过几种方法(如:透析)都不太理想,大家有没有好的方法供我参考参考,小弟不胜感激!
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2011-03-11 21:44:23
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yanjun3830
木虫
(正式写手)
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虫号: 1051135
引用回帖:
Originally posted by
qwz
at 2011-03-13 00:42:38:
应该D218 和D296都可以,看你溶液中的无机盐浓度了,不管是无机磷酸根,还是氯根,硫酸根吸附量都有影响的,要是没有其他阳离子,吸附过程没有蛋白变性析出的情况,每一百毫升的树脂ATP的饱和吸附量应该是在26克左 ...
我的磷酸化样品很少,大概只有0.5毫升,想找一种能除去ATP,并且磷酸化蛋白回收率高一点的方法!多谢你的帮助!
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13楼
2011-03-21 09:56:54
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铁杆木虫
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★
yanjun3830(金币
+1
):谢谢参与
这个找文献问老师啊
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4楼
2011-03-11 22:00:51
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qwz
铁杆木虫
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★ ★ ★
yanjun3830(金币
+1
):谢谢参与
看天(金币+2): 鼓励回答 2011-03-11 22:25:29
yanjun3830(金币+5): 非常的不错,多谢! 2011-03-12 09:22:55
方法一:水溶性的蛋白,稀释后,用强碱阴离子大孔树脂吸附ATP,流出磷酸化的蛋白,然后超滤滤浓缩。
方法二:直接6000D分子量的操滤膜浓缩,浓缩到一定浓度,关闭透过液,回流加入相同pH值的水,继续超滤,反复几次能基本除尽你要除去的东西,当然包括无极盐。
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5楼
2011-03-11 22:01:13
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看天
木虫
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★ ★
yanjun3830(金币
+1
):谢谢参与
lstt09nk(金币+1): 感谢参与 2011-03-12 09:32:01
ATP不是很稳定吧,跳跳PH看看会不会自动水解了
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6楼
2011-03-11 22:26:04
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