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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】如何除去磷酸化蛋白中残余的ATP
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yanjun3830

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】如何除去磷酸化蛋白中残余的ATP

小虫我做的课题是蛋白质磷酸化，但是目前实验需要把磷酸化蛋白中残余的ATP除去，试过几种方法（如：透析）都不太理想，大家有没有好的方法供我参考参考，小弟不胜感激！
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1楼 2011-03-11 21:44:23
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

copcsongzhen

金虫 (小有名气)
★
yanjun3830(金币+1):谢谢参与
先磷酸化   再过柱子
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15楼2011-04-26 11:42:01
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年年有余

铁杆木虫 (著名写手)
★
yanjun3830(金币+1):谢谢参与
这个找文献问老师啊
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4楼2011-03-11 22:00:51
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qwz

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
yanjun3830(金币+1):谢谢参与
看天(金币+2): 鼓励回答 2011-03-11 22:25:29
yanjun3830(金币+5): 非常的不错，多谢！ 2011-03-12 09:22:55
方法一：水溶性的蛋白，稀释后，用强碱阴离子大孔树脂吸附ATP，流出磷酸化的蛋白，然后超滤滤浓缩。
方法二：直接6000D分子量的操滤膜浓缩，浓缩到一定浓度，关闭透过液，回流加入相同pH值的水，继续超滤，反复几次能基本除尽你要除去的东西，当然包括无极盐。
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5楼2011-03-11 22:01:13
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看天

木虫 (知名作家)
★ ★
yanjun3830(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+1): 感谢参与 2011-03-12 09:32:01
ATP不是很稳定吧，跳跳PH看看会不会自动水解了
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6楼2011-03-11 22:26:04
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weishengsu5

木虫 (正式写手)
★
yanjun3830(金币+1):谢谢参与
应该有脱磷酸化的方法
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7楼2011-03-11 22:35:12
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weishengsu5

木虫 (正式写手)
★
yanjun3830(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by qwz at 2011-03-11 22:01:13:
方法一：水溶性的蛋白，稀释后，用强碱阴离子大孔树脂吸附ATP，流出磷酸化的蛋白，然后超滤滤浓缩。
方法二：直接6000D分子量的操滤膜浓缩，浓缩到一定浓度，关闭透过液，回流加入相同pH值的水，继续超滤，反复几 ...

学习了。。
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8楼2011-03-11 22:35:33
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yanjun3830

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 看天 at 2011-03-11 22:26:04:
ATP不是很稳定吧，跳跳PH看看会不会自动水解了

多谢，我试试看！
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9楼2011-03-12 09:24:16
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yanjun3830

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by qwz at 2011-03-11 22:01:13:
方法一：水溶性的蛋白，稀释后，用强碱阴离子大孔树脂吸附ATP，流出磷酸化的蛋白，然后超滤滤浓缩。
方法二：直接6000D分子量的操滤膜浓缩，浓缩到一定浓度，关闭透过液，回流加入相同pH值的水，继续超滤，反复几 ...

有没有相关的文献以及强碱阴离子大孔树脂的具体型号？
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10楼2011-03-12 10:31:48
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qwz

铁杆木虫 (正式写手)
★
yanjun3830(金币+1):谢谢参与
yanjun3830(金币+5): 谢谢！ 2011-03-21 09:51:33
应该D218 和D296都可以，看你溶液中的无机盐浓度了，不管是无机磷酸根，还是氯根，硫酸根吸附量都有影响的，要是没有其他阳离子，吸附过程没有蛋白变性析出的情况，每一百毫升的树脂ATP的饱和吸附量应该是在26克左右，计算以PH3以下，二钠盐计算。
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11楼2011-03-13 00:42:38
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qwz

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by weishengsu5 at 2011-03-11 22:35:33:
学习了。。

常温水解后还是同系列的东西，没有用的
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12楼2011-03-13 00:46:20
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yanjun3830

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by qwz at 2011-03-13 00:42:38:
应该D218 和D296都可以，看你溶液中的无机盐浓度了，不管是无机磷酸根，还是氯根，硫酸根吸附量都有影响的，要是没有其他阳离子，吸附过程没有蛋白变性析出的情况，每一百毫升的树脂ATP的饱和吸附量应该是在26克左 ...

我的磷酸化样品很少，大概只有0.5毫升，想找一种能除去ATP，并且磷酸化蛋白回收率高一点的方法！多谢你的帮助！
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13楼2011-03-21 09:56:54
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yeruoshui2楼
2011-03-11 21:58   回复  
yanjun3830(金币+1):谢谢参与
yeruoshui3楼
2011-03-11 21:58   回复  
yanjun3830(金币+1):谢谢参与
gongeleven14楼
2011-03-21 11:18   回复  
yanjun3830(金币+1):谢谢参与
copcsongzhen16楼
2011-04-26 11:45   回复  
yanjun3830(金币+1):谢谢参与
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