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chenting100铁虫 (初入文坛)
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cDNA序列3000kb，用ExTaq和LATaq都扩gDNA都扩不出来，有什么其他的办法吗？ 听说有一种Takara的酶，可以分段设计引物，把扩增每一小段拼接出来，有哪位大侠知道吗，指导一下，不胜感激啊 |
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2楼2011-03-11 14:46:54
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| 请问你是从cDNA里面RT-PCR扩增吗？怎么会有gDNA。是的话，那你可以用拼接PCR的方法来做。简单地说就是你设计一对全长引物，然后设计一对中间引物，大概在1500bp的位置，这一对中间引物必须是反向互补的，他们分别和全长引物扩增得到两端序列，然后这两端序列之间退火，用全长引物进行拼接PCR，就会得到你的基因了。特别提到的是酶必须用不加A尾的pfu酶，TAKARA的primer star就可以了，片段GC含量高的话，用相应的GC Buffer。好运。 |
3楼2011-03-11 14:59:34
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7楼2011-03-15 09:26:46