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laoshu16

银虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】关于去垢剂的那些麻烦事

小女子做膜蛋白结构的,超量表达全靠融合蛋白MBP帮忙,但是要做结构和功能就必须过河拆桥,把MBP甩掉,采用了流行的TEV酶切,发现努力了很久只能切开50%左右,时间还超长,查文献多说是去垢剂的关系,不用去垢剂,蛋白又会聚集沉淀,所以想查一下各去垢剂在CMC以上各浓度在水溶液中的状态,比如多少胶束,多少单体,不知道从哪查起。各位大哥大姐路过的捧个场帮个忙吧,或者传授一下TEV酶切的小窍门,小女子在这里拜谢各位了,祝各位大哥大姐小弟小妹实验顺利,文章高产!!
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laoshu16(金币+1):谢谢参与
我也是做结构的,呵呵,不过没有做过膜蛋白。你们做膜蛋白筛选条件用的是LCP法么?

不是有去垢剂去除的柱子么?可以试试去除部分去垢剂,以降低CMC,然后再行酶切。

[ Last edited by brightfuture01 on 2011-3-1 at 17:43 ]
2楼2011-03-01 17:42:02
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laoshu16

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-03-01 17:42:02:
我也是做结构的,呵呵,不过没有做过膜蛋白。你们做膜蛋白筛选条件用的是LCP法么?

不是有去垢剂去除的柱子么?可以试试去除部分去垢剂,以降低CMC,然后再行酶切。

[ Last edited by brightfuture01 on 2 ...

不能除去去垢剂 要保护着我的蛋白啊 降到cmc以下就形不成胶束了
3楼2011-03-01 18:04:59
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引用回帖:
Originally posted by laoshu16 at 2011-03-01 18:04:59:
不能除去去垢剂 要保护着我的蛋白啊 降到cmc以下就形不成胶束了

呵呵,你的去垢剂用的刚好么?一点都不过呀,
4楼2011-03-01 18:24:04
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198619

铜虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
请问你做出来了嘛?我也遇到了相同的问题,TEV切不动我的目的蛋白。做出来的话请问有什么高见呀!急需要解决,谢谢!
6楼2011-12-16 10:20:08
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heyar

铜虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
酶切缓冲尽量低盐,可以加5mM的DTT更有利于TEV酶切

发自小木虫IOS客户端
7楼2016-07-06 10:26:27
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简单回复
q876612365楼
2011-03-01 18:45   回复  
laoshu16(金币+1):谢谢参与
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