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laoshu16

银虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】关于去垢剂的那些麻烦事

小女子做膜蛋白结构的，超量表达全靠融合蛋白MBP帮忙，但是要做结构和功能就必须过河拆桥，把MBP甩掉，采用了流行的TEV酶切，发现努力了很久只能切开50%左右，时间还超长，查文献多说是去垢剂的关系，不用去垢剂，蛋白又会聚集沉淀，所以想查一下各去垢剂在CMC以上各浓度在水溶液中的状态，比如多少胶束，多少单体，不知道从哪查起。各位大哥大姐路过的捧个场帮个忙吧，或者传授一下TEV酶切的小窍门，小女子在这里拜谢各位了，祝各位大哥大姐小弟小妹实验顺利，文章高产！！

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1楼 2011-03-01 16:36:55

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laoshu16

银虫 (小有名气)

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引用回帖:

Originally posted by brightfuture01 at 2011-03-01 17:42:02:
我也是做结构的，呵呵，不过没有做过膜蛋白。你们做膜蛋白筛选条件用的是LCP法么？

不是有去垢剂去除的柱子么？可以试试去除部分去垢剂，以降低CMC，然后再行酶切。

[ Last edited by brightfuture01 on 2 ...

不能除去去垢剂要保护着我的蛋白啊降到cmc以下就形不成胶束了