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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于去垢剂的那些麻烦事
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laoshu16

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于去垢剂的那些麻烦事

小女子做膜蛋白结构的，超量表达全靠融合蛋白MBP帮忙，但是要做结构和功能就必须过河拆桥，把MBP甩掉，采用了流行的TEV酶切，发现努力了很久只能切开50%左右，时间还超长，查文献多说是去垢剂的关系，不用去垢剂，蛋白又会聚集沉淀，所以想查一下各去垢剂在CMC以上各浓度在水溶液中的状态，比如多少胶束，多少单体，不知道从哪查起。各位大哥大姐路过的捧个场帮个忙吧，或者传授一下TEV酶切的小窍门，小女子在这里拜谢各位了，祝各位大哥大姐小弟小妹实验顺利，文章高产！！
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1楼 2011-03-01 16:36:55
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★
laoshu16(金币+1):谢谢参与
我也是做结构的，呵呵，不过没有做过膜蛋白。你们做膜蛋白筛选条件用的是LCP法么？

不是有去垢剂去除的柱子么？可以试试去除部分去垢剂，以降低CMC，然后再行酶切。

[ Last edited by brightfuture01 on 2011-3-1 at 17:43 ]
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2楼2011-03-01 17:42:02
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laoshu16

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-03-01 17:42:02:
我也是做结构的，呵呵，不过没有做过膜蛋白。你们做膜蛋白筛选条件用的是LCP法么？

不是有去垢剂去除的柱子么？可以试试去除部分去垢剂，以降低CMC，然后再行酶切。

[ Last edited by brightfuture01 on 2 ...

不能除去去垢剂 要保护着我的蛋白啊 降到cmc以下就形不成胶束了
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3楼2011-03-01 18:04:59
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
引用回帖:
Originally posted by laoshu16 at 2011-03-01 18:04:59:
不能除去去垢剂 要保护着我的蛋白啊 降到cmc以下就形不成胶束了

呵呵，你的去垢剂用的刚好么？一点都不过呀，
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4楼2011-03-01 18:24:04
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198619

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
请问你做出来了嘛？我也遇到了相同的问题，TEV切不动我的目的蛋白。做出来的话请问有什么高见呀！急需要解决，谢谢！
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6楼2011-12-16 10:20:08
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heyar

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
酶切缓冲尽量低盐，可以加5mM的DTT更有利于TEV酶切

发自小木虫IOS客户端
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7楼2016-07-06 10:26:27
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q876612365楼
2011-03-01 18:45   回复  
laoshu16(金币+1):谢谢参与
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