应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】还是pcr问题
51/1返回列表
查看: 1560  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

鹏飞九万里

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】还是pcr问题 已有10人参与

我的目的基因片段约5kb，用的takara的long taq 酶，引物tm值为62度，按照买来的takara上的说明书加的量，pcr程序为
94    6min
94   1min
58    30s
72    5min
72    10min
电泳后只有引物二聚体，请教各位大侠，帮忙分析下原因，谢谢啊。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-02-22 15:27:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cyz20050505

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 鹏飞九万里 at 2011-02-22 15:27:06:
我的目的基因片段约5kb，用的takara的long taq 酶，引物tm值为62度，按照买来的takara上的说明书加的量，pcr程序为
94    6min
94   1min
58    30s
72    5min
72    10min
电泳后只有引物二聚体，请教各位 ...

LA-PCR对模板质量和引物结构要求比较严格，尽量用试剂盒提取DNA，主要怀疑是引物结构，不要去迷信primer或者oligo这些软件给出的引物评分，多设计几条，试试
赞一下 回复此楼
10楼2011-02-24 19:47:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

Tm不是62吗？怎么变成58了，循环数呢？
赞一下(1人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
2楼2011-02-22 16:09:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-02-22 18:44:48
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-02-22 18:45:28

确定引物没问题。确定体系没问题   单pcr条件不足说明什么。

   ps  最后延伸时间太短 是可以确定的。   预变性一般30s
赞一下(3人) 回复此楼
3楼2011-02-22 16:57:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 是的 有点长 2011-02-22 18:45:05
1949stone(金币+2): 是的 有点长 2011-02-22 18:45:24

因为片段有些长，延伸时间可以长一些，循环数多一些，还有退火温度怎么感觉不对啊~
最好先设个温度梯度试试！
赞一下(3人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-02-22 17:08:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿华中科技大学071000，求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +4 zxts12 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:20 by ilovexiaobin
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +10 枫桥ZL 2026-03-18 12/600 2026-03-21 22:02 by peike
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +3 NIFFFfff 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:23 by luoyongfeng
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +6 梨花珞晚风 2026-03-17 6/300 2026-03-21 03:40 by JourneyLucky
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂 +12 yangfz 2026-03-17 12/600 2026-03-21 03:30 by JourneyLucky
[考研] 299求调剂 +6 △小透明* 2026-03-17 6/300 2026-03-21 02:42 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中国石油大学（华东） 本科齐鲁工业大学 +3 石能伟 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:22 by JourneyLucky
[考研] 332求调剂 +4 ydfyh 2026-03-17 4/200 2026-03-21 02:20 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] 求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +4 @taotao 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:14 by JourneyLucky
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +5 tcxiaoxx 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:35 by laoshidan
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[论文投稿] 申请回稿延期一个月，编辑同意了。但系统上的时间没变，给编辑又写邮件了，没回复 10+3 wangf9518 2026-03-17 4/200 2026-03-19 23:55 by babero
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 326求调剂 +5 上岸的小葡 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:26 by ruiyingmiao
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨； 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭