应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】外源基因在293T细胞的表达
31/1返回列表
查看: 1449  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wuw579

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】外源基因在293T细胞的表达

有一段2400bp片段插入pcDNA3.1载体——酶切、PCR和测序验证是正确的；转染进293T细胞——同时转染GFP质粒，效率达90%以上证明操作没有问题；但是48小时和36小时候裂解蛋白,western没有结果；今天更是提取总RNA，反转录，PCR，证明是有目的基因的。为什么不表达呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-02-21 21:07:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
lstt09nk(金币+1): 鼓励交流 2011-02-21 22:16:55
wuw579(金币+1): 好像应该做一个 但是没有纯蛋白 2011-02-22 11:33:47

你确认抗体是ok的？做过阳性对照没
其次，有没有移码？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-02-21 22:09:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tigertang

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+6): 谢谢热心解答~ 2011-02-22 08:48:29
wuw579(金币+2): 谢谢 2011-02-22 11:34:51

1. 如果带tag，确认同框；如果N端不带tag，建议在ATG前加ACC，理论上可以提高翻译起始效率；

2. 带上阴性/阳性对照，确认抗体没有问题；

3.如果带tag，用tag的抗体杂一下；

4.建议共转GFP质粒确认转染效率。

good luck！
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-02-22 00:45:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wuw579 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭