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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教聚丙烯酰胺凝胶问题
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wlwabcd

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】请教聚丙烯酰胺凝胶问题

请问各位高手配制聚丙烯酰胺凝胶时TEMED和AP的作用都是什么啊？我记得一个是交联剂一个是促凝的，记不清楚了。还有就是各位在显色时是怎么操作的？谢谢各位了！
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1楼 2011-02-19 23:00:35
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zhengfan1109

银虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): good 2011-02-20 10:23:53
wlwabcd(金币+3): 2011-02-21 13:48:12
引用回帖:
Originally posted by wlwabcd at 2011-02-19 15:00:35:
请问各位高手配制聚丙烯酰胺凝胶时TEMED和AP的作用都是什么啊？我记得一个是交联剂一个是促凝的，记不清楚了。还有就是各位在显色时是怎么操作的？谢谢各位了！

APS为催化剂，temed为促凝剂。
聚合过程中，temed催化ap产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺间产生交联，从而形成三维网状结构。

显色有考染和银染，一般实验室时考染，配制染色液和脱色液，我们实验室的操作方式是，取胶，放入容器，微波炉加热30s，放置2min,倒染色液，加脱色液，震荡5min,倒脱色液，再加染色液重复之前步骤，然后就是加脱色液一直振荡至条带清晰了。
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2楼2011-02-20 01:44:06
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
dhd997(金币+1): good 2011-02-21 15:11:26

楼上正解，TEMED也称加速剂。你说的交联剂是甲叉双丙烯酰胺。
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3楼2011-02-20 10:32:09
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Jack_Y

金虫 (小有名气)
★ ★
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dhd997(金币+1): 欢迎交流 2011-02-21 15:11:44
引用回帖:
Originally posted by zhengfan1109 at 2011-02-19 17:44:06:
APS为催化剂，temed为促凝剂。
聚合过程中，temed催化ap产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺间产生交联，从而形成三维网状结构。

显色有考染和银染，一般实验室时考染，配 ...

对“聚合过程中，temed催化ap产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合”这句话有疑问？既然APS为催化剂，temed为促凝剂，怎么还说"temed催化ap产生自由基"呢？
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4楼2011-02-21 14:52:21
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jialili2009

金虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
Originally posted by wlwabcd at 2011-02-19 23:00:35:
请问各位高手配制聚丙烯酰胺凝胶时TEMED和AP的作用都是什么啊？我记得一个是交联剂一个是促凝的，记不清楚了。还有就是各位在显色时是怎么操作的？谢谢各位了！

我不是做有机的，只是最近需要所以接触较多，但是疑问更多，想问一下，你在这里做显色是想干什么的？
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5楼2011-04-01 18:19:32
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wlwabcd

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by jialili2009 at 2011-04-01 18:19:32:
我不是做有机的，只是最近需要所以接触较多，但是疑问更多，想问一下，你在这里做显色是想干什么的？

不显色没办法看条带啊！而且我也不是做邮寄的，我是做生物的
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6楼2011-04-07 17:08:21
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萧柏

金虫 (小有名气)
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西瓜(金币+2): 鼓励 2011-04-11 16:09:20
取出胶用考马斯亮蓝染色20min,用重蒸水洗2次（1min），加脱色液在脱色摇床上脱色1-2小时，如果底色还很重可以多脱几次，我一般脱3次就可以很清楚了，染色液可以回收利用
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7楼2011-04-11 15:03:06
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
染色用考马斯亮蓝，脱色的话，我是先用清水漂洗一次，然后直接加一勺氯化钠，脱色过夜。
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8楼2011-04-11 16:10:27
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boqikang

新虫 (初入文坛)
★
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谢各位大侠了   长见识了
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9楼2012-03-10 16:37:53
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a731705125

银虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
2楼: Originally posted by zhengfan1109 at 2011-02-20 01:44:06:
APS为催化剂，temed为促凝剂。
聚合过程中，temed催化ap产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺间产生交联，从而形成三维网状结构。

显色有考染和银染，一般实验室时考染，配制 ...

问一下，带跑出来后进行考染，你那步取胶，放入容器，微波炉加热30s，在加染色液前放微波炉是什么意思呢？
我们实验室好像是先加考马斯亮蓝再放微波炉吧，应该是方便考马斯亮蓝融进去。
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10楼2012-03-10 21:18:45
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