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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】做酵母的虫虫们帮忙看一下~
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】做酵母的虫虫们帮忙看一下~

需要按照文献培养带有某种质粒的酿酒酵母（S. cerevisiae），让它表达出特定蛋白，这时候用的培养基和普通YPD不一样，如原文描述：

"...studies were cultured in URA+ selective dextrose (SD)
medium (0.7% [w/v] Difco yeast nitrogen base, 2% [w/v] glucose, 0.005%
[w/v] adenine hemisulfate, and each of L-histidine, L-tryptophan and
L-leucine at concentration of 0.003% [w/v])."

查了《分子克隆实验指南》里面的SD培养基中的氮源好像是无氨基酸的，文献里的酵母氮源并没有特指without amino acid，那应该是什么样的呢，还有，搞不清楚什么是“URA+ selective dextrose”，URA+的意思。

还请各位做酵母的童鞋帮忙翻译一下...弄清楚了好订购培养基。。。。
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1楼 2011-02-19 20:27:10
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susizheng

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-02-19 22:05:23
baby1_9253344(金币+1): 谢谢详细解答！ 2011-02-21 09:19:06

SD培养基中的氮源是一种无氨基酸的氮源，试剂公司有的卖，YNB，买的时候记得弄清楚是否已经添加了硫酸铵。
URA+，指该实验中用到的酿酒酵母菌株是URA缺陷型，用SD筛选培养基时，需要添加URA.
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2楼2011-02-19 21:56:18
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
baby1_9253344(金币+1): 3Q 2011-02-21 09:19:23

要知道酵母里的是什么质粒
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3楼2011-02-20 12:30:51
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gongeleven at 2011-02-20 04:30:51:
要知道酵母里的是什么质粒

质粒p416GPD,centromeric plasmid
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4楼2011-02-20 16:13:55
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lwenshan

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
baby1_9253344(金币+1): 多谢~可惜刚才上Invitrogen官网，打不开，不晓得怎么下载相关资料了。。。 2011-02-21 09:20:08
dhd997(金币+2): 热心鼓励 2011-02-21 09:26:32

按照你给的参考文献，你的菌株可能是ura-，his-，try-，leu-的菌株，你的载体可能有URA选择标记，那么培养基中的YNB肯定是无氨基酸的，但是为啥没写加入ura的量呢？酿酒酵母相关知识你可以下载Invitrogen的酿酒酵母表达载体相关资料
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5楼2011-02-20 20:09:29
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-02-19 13:56:18:
SD培养基中的氮源是一种无氨基酸的氮源，试剂公司有的卖，YNB，买的时候记得弄清楚是否已经添加了硫酸铵。
URA+，指该实验中用到的酿酒酵母菌株是URA缺陷型，用SD筛选培养基时，需要添加URA.

谢谢你的详细解答~那如何判断是否添加硫酸铵，或者说，什么培养基需要添加硫酸铵，什么时候不需要呢？
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6楼2011-02-21 09:15:37
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susizheng

木虫 (著名写手)
★
silicare(金币+1): 谢谢参与 2011-02-21 12:25:34
baby1_9253344(金币+1): 呵呵发现我这几天发问都是你给回复的啊，在此谢过了~ 2011-02-21 15:22:37
引用回帖:
Originally posted by baby1_9253344 at 2011-02-21 01:15:37:
谢谢你的详细解答~那如何判断是否添加硫酸铵，或者说，什么培养基需要添加硫酸铵，什么时候不需要呢？

YNB这种试剂里面的硫酸铵有的是需要自己添加的，有的是已经添加好的，问问试剂公司就可以了，不过一般都是添加好的，不用担心。
今天看了下5楼的回复，感觉他说的有道理。URA+应该不是指要在SD添加URA，应该是指酿酒酵母本身是URA缺陷型的，而载体上有URA筛选标记，正好形成互补。
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7楼2011-02-21 10:41:56
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-02-21 02:41:56:
YNB这种试剂里面的硫酸铵有的是需要自己添加的，有的是已经添加好的，问问试剂公司就可以了，不过一般都是添加好的，不用担心。
今天看了下5楼的回复，感觉他说的有道理。URA+应该不是指要在SD添加URA，应该是 ...

哎....我彻底晕了，大肠杆菌的克隆什么的还没搞明白呢，又得学习酵母的...
此酿酒酵母为S. cerevisiae W303(MATa leu 2-3/112 ura 3-1 trp 1-1 his 3-11/15 ade 2-1 can 1-100 mal 10 GAL SUC2)我实在看不懂，跟密码一样...
质粒p416GPD的相关性状，在文献中查到，叫URA3作为它的marker gene。不懂什么意思额。。。
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8楼2011-02-21 15:47:19
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susizheng

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by baby1_9253344 at 2011-02-21 07:47:19:
哎....我彻底晕了，大肠杆菌的克隆什么的还没搞明白呢，又得学习酵母的...
此酿酒酵母为S. cerevisiae W303(MATa leu 2-3/112 ura 3-1 trp 1-1 his 3-11/15 ade 2-1 can 1-100 mal 10 GAL SUC2)我实在看 ...

S. cerevisiae W303(MATa leu 2-3/112 ura 3-1 trp 1-1 his 3-11/15 ade 2-1 can 1-100 mal 10 GAL SUC2)括号里面指该菌株的缺失的基因啊，比如缺失leu，ura， trp......，用SD培养基是只有添加了这些氨基酸或者嘧啶的时候，酿酒酵母才能生长，转入酿酒酵母的质粒后，由于质粒上有URA基因，因此，转质粒后，酿酒酵母在未添加URA的SD培养基上可以生长，从而达到筛选的目的。
没什么难懂的啊，看看酿酒酵母drop-out培养基相关知识就OK了。
http://www.hopebiol.com/asphtml/refere104.htm

[ Last edited by susizheng on 2011-2-21 at 16:27 ]
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9楼2011-02-21 16:25:40
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-02-21 08:25:40:
S. cerevisiae W303(MATa leu 2-3/112 ura 3-1 trp 1-1 his 3-11/15 ade 2-1 can 1-100 mal 10 GAL SUC2)括号里面指该菌株的缺失的基因啊，比如缺失leu，ura， trp......，用SD培养基是只有添加了这些氨基酸或 ...

oh, I see...经你这么一翻译俺就明白了，3Q...
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10楼2011-02-21 16:32:22
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