应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】做酵母的虫虫们帮忙看一下~
101/1返回列表
查看: 1596  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

baby1_9253344

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】做酵母的虫虫们帮忙看一下~

需要按照文献培养带有某种质粒的酿酒酵母（S. cerevisiae），让它表达出特定蛋白，这时候用的培养基和普通YPD不一样，如原文描述：

"...studies were cultured in URA+ selective dextrose (SD)
medium (0.7% [w/v] Difco yeast nitrogen base, 2% [w/v] glucose, 0.005%
[w/v] adenine hemisulfate, and each of L-histidine, L-tryptophan and
L-leucine at concentration of 0.003% [w/v])."

查了《分子克隆实验指南》里面的SD培养基中的氮源好像是无氨基酸的，文献里的酵母氮源并没有特指without amino acid，那应该是什么样的呢，还有，搞不清楚什么是“URA+ selective dextrose”，URA+的意思。

还请各位做酵母的童鞋帮忙翻译一下...弄清楚了好订购培养基。。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-02-19 20:27:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-02-19 22:05:23
baby1_9253344(金币+1): 谢谢详细解答！ 2011-02-21 09:19:06

SD培养基中的氮源是一种无氨基酸的氮源，试剂公司有的卖，YNB，买的时候记得弄清楚是否已经添加了硫酸铵。
URA+，指该实验中用到的酿酒酵母菌株是URA缺陷型，用SD筛选培养基时，需要添加URA.
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-02-19 21:56:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
baby1_9253344(金币+1): 3Q 2011-02-21 09:19:23

要知道酵母里的是什么质粒
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-02-20 12:30:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baby1_9253344

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gongeleven at 2011-02-20 04:30:51:
要知道酵母里的是什么质粒

质粒p416GPD,centromeric plasmid
赞一下 回复此楼
4楼2011-02-20 16:13:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwenshan

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
baby1_9253344(金币+1): 多谢~可惜刚才上Invitrogen官网，打不开，不晓得怎么下载相关资料了。。。 2011-02-21 09:20:08
dhd997(金币+2): 热心鼓励 2011-02-21 09:26:32

按照你给的参考文献，你的菌株可能是ura-，his-，try-，leu-的菌株，你的载体可能有URA选择标记，那么培养基中的YNB肯定是无氨基酸的，但是为啥没写加入ura的量呢？酿酒酵母相关知识你可以下载Invitrogen的酿酒酵母表达载体相关资料
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-02-20 20:09:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baby1_9253344

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-02-19 13:56:18:
SD培养基中的氮源是一种无氨基酸的氮源，试剂公司有的卖，YNB，买的时候记得弄清楚是否已经添加了硫酸铵。
URA+，指该实验中用到的酿酒酵母菌株是URA缺陷型，用SD筛选培养基时，需要添加URA.

谢谢你的详细解答~那如何判断是否添加硫酸铵，或者说，什么培养基需要添加硫酸铵，什么时候不需要呢？
赞一下 回复此楼
6楼2011-02-21 09:15:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)
★
silicare(金币+1): 谢谢参与 2011-02-21 12:25:34
baby1_9253344(金币+1): 呵呵发现我这几天发问都是你给回复的啊，在此谢过了~ 2011-02-21 15:22:37
引用回帖:
Originally posted by baby1_9253344 at 2011-02-21 01:15:37:
谢谢你的详细解答~那如何判断是否添加硫酸铵，或者说，什么培养基需要添加硫酸铵，什么时候不需要呢？

YNB这种试剂里面的硫酸铵有的是需要自己添加的，有的是已经添加好的，问问试剂公司就可以了，不过一般都是添加好的，不用担心。
今天看了下5楼的回复，感觉他说的有道理。URA+应该不是指要在SD添加URA，应该是指酿酒酵母本身是URA缺陷型的，而载体上有URA筛选标记，正好形成互补。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-02-21 10:41:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baby1_9253344

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-02-21 02:41:56:
YNB这种试剂里面的硫酸铵有的是需要自己添加的，有的是已经添加好的，问问试剂公司就可以了，不过一般都是添加好的，不用担心。
今天看了下5楼的回复，感觉他说的有道理。URA+应该不是指要在SD添加URA，应该是 ...

哎....我彻底晕了，大肠杆菌的克隆什么的还没搞明白呢，又得学习酵母的...
此酿酒酵母为S. cerevisiae W303(MATa leu 2-3/112 ura 3-1 trp 1-1 his 3-11/15 ade 2-1 can 1-100 mal 10 GAL SUC2)我实在看不懂，跟密码一样...
质粒p416GPD的相关性状，在文献中查到，叫URA3作为它的marker gene。不懂什么意思额。。。
赞一下 回复此楼
8楼2011-02-21 15:47:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by baby1_9253344 at 2011-02-21 07:47:19:
哎....我彻底晕了，大肠杆菌的克隆什么的还没搞明白呢，又得学习酵母的...
此酿酒酵母为S. cerevisiae W303(MATa leu 2-3/112 ura 3-1 trp 1-1 his 3-11/15 ade 2-1 can 1-100 mal 10 GAL SUC2)我实在看 ...

S. cerevisiae W303(MATa leu 2-3/112 ura 3-1 trp 1-1 his 3-11/15 ade 2-1 can 1-100 mal 10 GAL SUC2)括号里面指该菌株的缺失的基因啊，比如缺失leu，ura， trp......，用SD培养基是只有添加了这些氨基酸或者嘧啶的时候，酿酒酵母才能生长，转入酿酒酵母的质粒后，由于质粒上有URA基因，因此，转质粒后，酿酒酵母在未添加URA的SD培养基上可以生长，从而达到筛选的目的。
没什么难懂的啊，看看酿酒酵母drop-out培养基相关知识就OK了。
http://www.hopebiol.com/asphtml/refere104.htm

[ Last edited by susizheng on 2011-2-21 at 16:27 ]
赞一下 回复此楼
9楼2011-02-21 16:25:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baby1_9253344

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-02-21 08:25:40:
S. cerevisiae W303(MATa leu 2-3/112 ura 3-1 trp 1-1 his 3-11/15 ade 2-1 can 1-100 mal 10 GAL SUC2)括号里面指该菌株的缺失的基因啊，比如缺失leu，ura， trp......，用SD培养基是只有添加了这些氨基酸或 ...

oh, I see...经你这么一翻译俺就明白了，3Q...
赞一下 回复此楼
10楼2011-02-21 16:32:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 baby1_9253344 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕326求调剂 +5 墨煜姒莘 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:30 by 木瓜膏
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 283求调剂 +10 小楼。 2026-03-12 14/700 2026-03-16 16:08 by 13811244083
[考研] 312求调剂 +3 陌宸希 2026-03-16 4/200 2026-03-16 15:06 by peike
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +3 自由煎饼果子 2026-03-16 3/150 2026-03-16 14:10 by 运气yunqi
[教师之家] 焦虑 +7 水冰月月野兔 2026-03-13 9/450 2026-03-16 10:00 by Quakerbird
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-15 6/300 2026-03-16 08:00 by wang_dand
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 14/700 2026-03-15 23:53 by 不负韶华的虎
[考研] 274求调剂 +4 时间点 2026-03-13 4/200 2026-03-15 15:29 by Rambo13
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家，不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 一志愿华中农业大学071010，总分三百二,求调剂 +3 困困困困坤坤 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:35 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 Dizzy123@ 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:02 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 085600英一数二总分302 前三科235 精通机器学习 一志愿哈工大 +4 林yaxin 2026-03-12 4/200 2026-03-13 22:04 by 星空星月
[考研] ［0860］321分求调剂，ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[考研] 315求调剂 +9 小羊小羊_ 2026-03-11 10/500 2026-03-13 21:13 by SXNU李老师
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +8 困于星晨 2026-03-12 10/500 2026-03-13 15:42 by ms629
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂（食品/专硕） +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
[考研] 085602化工求调剂 +7 董boxing 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:07 by BruceLiu320
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭