24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1636  |  回复: 9

baby1_9253344

金虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】做酵母的虫虫们帮忙看一下~

需要按照文献培养带有某种质粒的酿酒酵母(S. cerevisiae),让它表达出特定蛋白,这时候用的培养基和普通YPD不一样,如原文描述:

"...studies were cultured in URA+ selective dextrose (SD)
medium (0.7% [w/v] Difco yeast nitrogen base, 2% [w/v] glucose, 0.005%
[w/v] adenine hemisulfate, and each of L-histidine, L-tryptophan and
L-leucine at concentration of 0.003% [w/v])."

查了《分子克隆实验指南》里面的SD培养基中的氮源好像是无氨基酸的,文献里的酵母氮源并没有特指without amino acid,那应该是什么样的呢,还有,搞不清楚什么是“URA+ selective dextrose”,URA+的意思。

还请各位做酵母的童鞋帮忙翻译一下...弄清楚了好订购培养基。。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-02-19 22:05:23
baby1_9253344(金币+1): 谢谢详细解答! 2011-02-21 09:19:06

SD培养基中的氮源是一种无氨基酸的氮源,试剂公司有的卖,YNB,买的时候记得弄清楚是否已经添加了硫酸铵。
URA+,指该实验中用到的酿酒酵母菌株是URA缺陷型,用SD筛选培养基时,需要添加URA.
2楼2011-02-19 21:56:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
baby1_9253344(金币+1): 3Q 2011-02-21 09:19:23

要知道酵母里的是什么质粒
3楼2011-02-20 12:30:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baby1_9253344

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by gongeleven at 2011-02-20 04:30:51:
要知道酵母里的是什么质粒

质粒p416GPD,centromeric plasmid
4楼2011-02-20 16:13:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwenshan

木虫 (小有名气)


★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
baby1_9253344(金币+1): 多谢~可惜刚才上Invitrogen官网,打不开,不晓得怎么下载相关资料了。。。 2011-02-21 09:20:08
dhd997(金币+2): 热心鼓励 2011-02-21 09:26:32

按照你给的参考文献,你的菌株可能是ura-,his-,try-,leu-的菌株,你的载体可能有URA选择标记,那么培养基中的YNB肯定是无氨基酸的,但是为啥没写加入ura的量呢?酿酒酵母相关知识你可以下载Invitrogen的酿酒酵母表达载体相关资料
5楼2011-02-20 20:09:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baby1_9253344

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-02-19 13:56:18:
SD培养基中的氮源是一种无氨基酸的氮源,试剂公司有的卖,YNB,买的时候记得弄清楚是否已经添加了硫酸铵。
URA+,指该实验中用到的酿酒酵母菌株是URA缺陷型,用SD筛选培养基时,需要添加URA.

谢谢你的详细解答~那如何判断是否添加硫酸铵,或者说,什么培养基需要添加硫酸铵,什么时候不需要呢?
6楼2011-02-21 09:15:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare(金币+1): 谢谢参与 2011-02-21 12:25:34
baby1_9253344(金币+1): 呵呵发现我这几天发问都是你给回复的啊,在此谢过了~ 2011-02-21 15:22:37
引用回帖:
Originally posted by baby1_9253344 at 2011-02-21 01:15:37:
谢谢你的详细解答~那如何判断是否添加硫酸铵,或者说,什么培养基需要添加硫酸铵,什么时候不需要呢?

YNB这种试剂里面的硫酸铵有的是需要自己添加的,有的是已经添加好的,问问试剂公司就可以了,不过一般都是添加好的,不用担心。
今天看了下5楼的回复,感觉他说的有道理。URA+应该不是指要在SD添加URA,应该是指酿酒酵母本身是URA缺陷型的,而载体上有URA筛选标记,正好形成互补。
7楼2011-02-21 10:41:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baby1_9253344

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-02-21 02:41:56:
YNB这种试剂里面的硫酸铵有的是需要自己添加的,有的是已经添加好的,问问试剂公司就可以了,不过一般都是添加好的,不用担心。
今天看了下5楼的回复,感觉他说的有道理。URA+应该不是指要在SD添加URA,应该是 ...

哎....我彻底晕了,大肠杆菌的克隆什么的还没搞明白呢,又得学习酵母的...
此酿酒酵母为S. cerevisiae W303(MATa leu 2-3/112 ura 3-1 trp 1-1 his 3-11/15 ade 2-1 can 1-100 mal 10 GAL SUC2)我实在看不懂,跟密码一样...
质粒p416GPD的相关性状,在文献中查到,叫URA3作为它的marker gene。不懂什么意思额。。。
8楼2011-02-21 15:47:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
引用回帖:
Originally posted by baby1_9253344 at 2011-02-21 07:47:19:
哎....我彻底晕了,大肠杆菌的克隆什么的还没搞明白呢,又得学习酵母的...
此酿酒酵母为S. cerevisiae W303(MATa leu 2-3/112 ura 3-1 trp 1-1 his 3-11/15 ade 2-1 can 1-100 mal 10 GAL SUC2)我实在看 ...

S. cerevisiae W303(MATa leu 2-3/112 ura 3-1 trp 1-1 his 3-11/15 ade 2-1 can 1-100 mal 10 GAL SUC2)括号里面指该菌株的缺失的基因啊,比如缺失leu,ura, trp......,用SD培养基是只有添加了这些氨基酸或者嘧啶的时候,酿酒酵母才能生长,转入酿酒酵母的质粒后,由于质粒上有URA基因,因此,转质粒后,酿酒酵母在未添加URA的SD培养基上可以生长,从而达到筛选的目的。
没什么难懂的啊,看看酿酒酵母drop-out培养基相关知识就OK了。
http://www.hopebiol.com/asphtml/refere104.htm

[ Last edited by susizheng on 2011-2-21 at 16:27 ]
9楼2011-02-21 16:25:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baby1_9253344

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-02-21 08:25:40:
S. cerevisiae W303(MATa leu 2-3/112 ura 3-1 trp 1-1 his 3-11/15 ade 2-1 can 1-100 mal 10 GAL SUC2)括号里面指该菌株的缺失的基因啊,比如缺失leu,ura, trp......,用SD培养基是只有添加了这些氨基酸或 ...

oh, I see...经你这么一翻译俺就明白了,3Q...
10楼2011-02-21 16:32:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 baby1_9253344 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +5 chenxrlkx 2026-04-05 7/350 2026-04-06 07:54 by houyaoxu
[考研] 一志愿C9的化学工程(085602) 340分,感觉校内调剂无望,求调剂 +12 万事宜臻 2026-04-04 12/600 2026-04-06 07:46 by 无际的草原
[考研] 材料专硕322 +9 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-05 9/450 2026-04-06 07:36 by 小小树2024
[考研] 材料调剂 +14 壹贰贰亿 2026-04-04 14/700 2026-04-05 23:31 by 来看流星雨10
[考研] 313求调剂 +5 海日海日 2026-04-04 7/350 2026-04-05 13:58 by imissbao
[考研] 数一英一 347 人工智能国奖论文都有求调剂 +3 乌拉儿山脉 2026-03-30 7/350 2026-04-05 10:32 by zhq0425
[考研] 求调剂 +3 小沢 2026-04-03 3/150 2026-04-05 09:10 by sihailian3
[考研] 考研调剂 +6 15615482637 2026-04-04 6/300 2026-04-04 22:43 by yu221
[考研] 材料与化工306分找调剂 +23 沧海轻舟e 2026-04-02 27/1350 2026-04-04 21:52 by laoshidan
[考研] 求生物学调剂 +14 15172915737 2026-04-01 14/700 2026-04-04 20:13 by babysonlkd
[考研] 331求调剂 +3 niby 2026-04-02 3/150 2026-04-04 19:56 by 蓝云思雨
[考研] 348分环境工程·调剂 +10 吴彦祖24k 2026-04-03 11/550 2026-04-04 14:19 by 无际的草原
[考研] 本9一志愿2 0854低分专硕286求调剂 +9 芒种111 2026-04-04 9/450 2026-04-04 11:01 by tangruihua
[考研] 化工求调剂 +11 荔香芝士椰奶 2026-04-03 11/550 2026-04-03 22:06 by 啵啵啵0119
[考研] 求调剂 +3 usbdndj 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:10 by dxiaoxin
[考研] 一志愿武汉理工0856,初试334 +3 26考研材料 2026-04-02 3/150 2026-04-02 21:22 by dongzh2009
[考研] 285求调剂 +8 AZMK 2026-04-02 11/550 2026-04-02 20:16 by yulian1987
[考研] 298求B区调剂 +4 zzz,,r 2026-04-02 5/250 2026-04-02 12:17 by 土木硕士招生
[考研] 353求调剂 +4 拉钩不许变 2026-04-01 4/200 2026-04-01 18:10 by 记事本2026
[考研] 江苏苏北高校诚邀调剂同学 +3 zzll406 2026-03-31 3/150 2026-03-31 16:54 by 及时行乐fan
信息提示
请填处理意见