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baby1_9253344

金虫 (小有名气)

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虫号: 535686

[交流] 【求助/交流】做酵母的虫虫们帮忙看一下~

需要按照文献培养带有某种质粒的酿酒酵母（S. cerevisiae），让它表达出特定蛋白，这时候用的培养基和普通YPD不一样，如原文描述：

"...studies were cultured in URA+ selective dextrose (SD)
medium (0.7% [w/v] Difco yeast nitrogen base, 2% [w/v] glucose, 0.005%
[w/v] adenine hemisulfate, and each of L-histidine, L-tryptophan and
L-leucine at concentration of 0.003% [w/v])."

查了《分子克隆实验指南》里面的SD培养基中的氮源好像是无氨基酸的，文献里的酵母氮源并没有特指without amino acid，那应该是什么样的呢，还有，搞不清楚什么是“URA+ selective dextrose”，URA+的意思。

还请各位做酵母的童鞋帮忙翻译一下...弄清楚了好订购培养基。。。。

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1楼2011-02-19 20:27:10

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

引用回帖:

Originally posted by baby1_9253344 at 2011-02-21 07:47:19:
哎....我彻底晕了，大肠杆菌的克隆什么的还没搞明白呢，又得学习酵母的...
此酿酒酵母为S. cerevisiae W303(MATa leu 2-3/112 ura 3-1 trp 1-1 his 3-11/15 ade 2-1 can 1-100 mal 10 GAL SUC2)我实在看 ...

S. cerevisiae W303(MATa leu 2-3/112 ura 3-1 trp 1-1 his 3-11/15 ade 2-1 can 1-100 mal 10 GAL SUC2)括号里面指该菌株的缺失的基因啊，比如缺失leu，ura， trp......，用SD培养基是只有添加了这些氨基酸或者嘧啶的时候，酿酒酵母才能生长，转入酿酒酵母的质粒后，由于质粒上有URA基因，因此，转质粒后，酿酒酵母在未添加URA的SD培养基上可以生长，从而达到筛选的目的。
没什么难懂的啊，看看酿酒酵母drop-out培养基相关知识就OK了。
http://www.hopebiol.com/asphtml/refere104.htm

[ Last edited by susizheng on 2011-2-21 at 16:27 ]