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[交流]
【交流】用PBS缓冲液测试后碰到的问题
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大家好。 测量一种小分子的药物。测试条件是Waters的仪器，用C18柱，内径4mm，自动进样。 按照文献报道，采用的流动相 A：PBS(M=0.08M,pH=3), B：乙腈 A：B=65：35 在实验过程中遇到如下问题想请教下大家。 1. 配置PBS缓冲液后，用孔径0.45的PALL滤纸在砂芯漏斗上减压过滤过滤。因为先过滤的纯水，没什么问题。接着过滤PBS缓冲液的时候，流速特别慢，几乎是到了每秒才一滴，影响了实验的速度。经检测，不是漏斗的问题，因为先前过滤水的时候没问题；滤纸拿下，直接用砂芯漏斗抽滤纯水也没问题。于是怀疑是滤纸有问题。我每次都是用同一张滤纸先过滤纯水，再滤PBS。想问下大家，用0.45的滤纸过滤PBS为什么会那么慢呢? 会堵塞滤纸吗？ 2.看到大家议论说，PBS缓冲液的浓度不能太大。我采用文献中的0.08M，与乙腈的比为 65：35，没有发现柱子被堵。请问这样子是不是很冒险啊。还是把浓度降低到0.01M比较保险？ 3. 测试前，要将准备走PBS的通道先用纯水冲先冲洗30min是吗？比如我准备用A：PBS，B：乙腈，实验开始的时候先用乙腈稳定仪器30min,一般都是再直接用和实验条件一样的流动相配比平衡柱子1h。此次实验中因为有PBS，是不是再应该用纯水冲洗B通道冲洗30min 呢？如果是，那么此时的冲洗条件该怎么设置，乙腈和水的比例为多少比较合适呢？ 4. 实验结束后，也需要用纯水冲洗色谱柱。我直接将通PBS的通道换成纯水，然后用水：乙腈=95：5冲洗30min， 再用乙腈冲洗30min。最后将色谱柱保存在纯乙腈中，这样是否合理？ 5.两天两次相同条件的实验，我就测一个纯的HPLC级的物质，出峰时间由7.2min推迟到8.2min左右。这会是哪些原因引起的呢？我实验的温度是仪器恒温30度。 谢谢大家！ |
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3楼2011-02-13 21:05:20
xuzhexins0
禁虫 (小有名气)
nancy1984(金币+1): 想多听听这里高人的一间嘛~ 2011-02-14 08:40:29
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4楼2011-02-13 21:40:52
