| 查看: 3945 | 回复: 8 | |||
[交流]
【交流】用PBS缓冲液测试后碰到的问题
|
|||
|
大家好。 测量一种小分子的药物。测试条件是Waters的仪器，用C18柱，内径4mm，自动进样。 按照文献报道，采用的流动相 A：PBS(M=0.08M,pH=3), B：乙腈 A：B=65：35 在实验过程中遇到如下问题想请教下大家。 1. 配置PBS缓冲液后，用孔径0.45的PALL滤纸在砂芯漏斗上减压过滤过滤。因为先过滤的纯水，没什么问题。接着过滤PBS缓冲液的时候，流速特别慢，几乎是到了每秒才一滴，影响了实验的速度。经检测，不是漏斗的问题，因为先前过滤水的时候没问题；滤纸拿下，直接用砂芯漏斗抽滤纯水也没问题。于是怀疑是滤纸有问题。我每次都是用同一张滤纸先过滤纯水，再滤PBS。想问下大家，用0.45的滤纸过滤PBS为什么会那么慢呢? 会堵塞滤纸吗？ 2.看到大家议论说，PBS缓冲液的浓度不能太大。我采用文献中的0.08M，与乙腈的比为 65：35，没有发现柱子被堵。请问这样子是不是很冒险啊。还是把浓度降低到0.01M比较保险？ 3. 测试前，要将准备走PBS的通道先用纯水冲先冲洗30min是吗？比如我准备用A：PBS，B：乙腈，实验开始的时候先用乙腈稳定仪器30min,一般都是再直接用和实验条件一样的流动相配比平衡柱子1h。此次实验中因为有PBS，是不是再应该用纯水冲洗B通道冲洗30min 呢？如果是，那么此时的冲洗条件该怎么设置，乙腈和水的比例为多少比较合适呢？ 4. 实验结束后，也需要用纯水冲洗色谱柱。我直接将通PBS的通道换成纯水，然后用水：乙腈=95：5冲洗30min， 再用乙腈冲洗30min。最后将色谱柱保存在纯乙腈中，这样是否合理？ 5.两天两次相同条件的实验，我就测一个纯的HPLC级的物质，出峰时间由7.2min推迟到8.2min左右。这会是哪些原因引起的呢？我实验的温度是仪器恒温30度。 谢谢大家！ |
回复此楼» 猜你喜欢
081700，311，求调剂
已经有15人回复
-
一志愿北京化工085600 310分求调剂
已经有18人回复
-
085600材料与化工301分求调剂院校
已经有4人回复
-
材料与化工371求调剂
已经有14人回复
-
336材料与化工085600求调剂
已经有7人回复
-
材料334求调剂
已经有18人回复
-
331求调剂
已经有8人回复
-
332求调剂
已经有17人回复
-
一志愿南京航空航天大学 材料与化工329分求调剂
已经有4人回复
-
材料专硕322
已经有7人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PBS缓冲液中加入PEG
已经有6人回复
- 求助关于pbs缓冲溶液的配置
已经有10人回复
- 关于PBS缓冲液的配制
已经有6人回复
- 【求助】PBS缓冲液的pH值问题
已经有7人回复
- 【求助】请问，如何配制PH 7.4的PBS缓冲液，（使用NA2HPO4和KH2PO4),谢谢！
已经有14人回复
- 【求助/交流】PBS缓冲液困扰
已经有3人回复
- 【求助/交流】PBS缓冲溶液高温灭菌后怎么变浑浊了呢？
已经有19人回复
- 求教PBS缓冲液的pH问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】有关磷酸盐缓冲液的问题PBS和PB的区别
已经有14人回复
- 【求助/交流】PBS缓冲液用什么来调ph值呢？
已经有30人回复
- 【求助/交流】离心后的青枯菌，为什么要用pbs缓冲液洗呢？
已经有3人回复
- 【求助/交流】PBS缓冲液浓度的含义
已经有13人回复
- 【交流】pbs缓冲液的配置
已经有3人回复
- 【讨论】关于PBS缓冲液的问题
已经有3人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
欢迎调剂佛山大学资源与环境专业硕士
+2/142
-
延安大学化学与化工学院接收调剂生（化学、化工学硕和材料与化工专硕）
+5/140
-
济南大学前沿交叉科学研究院新能源材料与传感器件团队 2026研究生调剂招生
+1/87
-
河南农业大学理学院仿生应用化学创新团队招收硕士调剂生
+1/51
-
化学，材料方向研究生调剂
+2/48
-
某211招收光学工程 仪器科学与技术 tiaoji 研究生 若干名！！！
+1/48
-
广东五邑大学夏旺课题组硕士调剂公告
+1/41
-
河南工业大学化学化工学院 2026 年硕士调剂正在进行！
+1/38
-
江西理工大学稀土学院招材料类硕士研究生，稀土光功能材料方向，非诚勿扰
+1/37
-
企业出国访问交流求助
+1/37
-
抗病毒性传染病创新药物全国重点实验室—接收化学、生物、药学、生物与医药调剂考生
+1/26
-
★上海★上海工程技术大学·环境与资源创新中心（ICER）接收化工材料环境等学科调剂生
+1/12
-
电力全国重点实验室双一流A类长江学者团队招2026年全日制博士1名（4月3日截止）
+1/10
-
0854,0858调剂招生
+1/8
-
山西师范大学2026年化学硕士点招收调剂生
+1/7
-
国家大人才课题组招收化学、材料化工类2026年调剂生
+1/5
-
【招收调剂】07/08/09学生看过来 环境 农业 生态学 生物 化学 计算机 材料 市政
+1/5
-
IL-4蛋白在肿瘤免疫抑制性骨髓生成中的作用机制研究
+1/4
-
2026年云南大学青拔课题组招收地理学，大气科学、资源与环境等专业研究生
+1/3
-
2026年武汉纺织大学全国重点实验室吕永钢教授课题组招收调剂
+1/1
2楼2011-02-13 14:38:41
3楼2011-02-13 21:05:20
xuzhexins0
禁虫 (小有名气)
nancy1984(金币+1): 想多听听这里高人的一间嘛~ 2011-02-14 08:40:29
|
本帖内容被屏蔽 |
4楼2011-02-13 21:40:52
nancy1984(金币+5): 非常你的建议~我会改进下实验的。 2011-02-14 11:15:40
|
1. 所用缓冲盐杂质过多（滤后会发现有很多黑渣，尤其是国内产品），建议每次少率一些，经常换膜，或者换用进口缓冲盐；再者，PBS存放时间过长，出现菌落，导致流速较慢；其次，盐浓度过高也是影响流速的原因。 2.缓冲盐浓度有点高，但是上到0.1也尝试过，问题不大？ 3. 测试前，要将准备走PBS的通道先用纯水冲先冲洗30min？比如准备用A：PBS，B：乙腈，实验开始的时候先用乙腈稳定仪器30min,再用A:水，B：乙腈冲洗30min；然后用和实验条件一样的流动相配比平衡柱子1h，然后进样。此次实验中因为有PBS，应该用纯水冲洗A通道30min，此时的冲洗条件-乙腈和水的比例逐渐改变为与测试比例一致，并进行平衡。 4. 实验结束后，也需要用纯水冲洗PBS通道。直接将通PBS的通道换成纯水，然后水：乙腈=65：35冲洗30min；再用水：乙腈=95：5冲洗30min， 再用乙腈冲洗30min。最后将色谱柱保存在纯乙腈中 5.两天两次相同条件的实验，我就测一个纯的HPLC级的物质，出峰时间由7.2min推迟到8.2min左右。色谱柱平衡不够；缓冲盐的配制有差异。 |
5楼2011-02-14 08:39:43
6楼2011-02-14 09:16:54
nancy1984(金币+4): 2011-02-16 12:22:00
|
1、5楼正解。需补充一下，滤膜分正反的，用反了就容易堵、慢 2、0.2M的我也用过，这个除了浓度外，还与酸度和有机相比例有关。一般磷酸盐在酸性下溶解度大，比中性时候大很多倍 3和4、其实这个得规律很简单：开机——纯有机相——水相——缓冲液（工作流动相）——水相——纯有机相——关机。只要是含缓冲盐的基本都是这个顺序。另外要注意的是C18柱一般不能用纯水，容易损坏，所谓水相一般是指含甲醇5%~10%的水溶液。还有就是冲洗的时间与柱子的尺寸和流速有关，并不一定是30min，一般根据是流动相流过的体积达到柱体积的10倍以上 5、这个问题比较复杂，可能的原因很多，要具体分析 5 |
7楼2011-02-15 23:43:23
nancy1984(金币+2): 怎么优化啊？能指点下嘛？ 2011-02-16 12:22:36
|
本帖内容被屏蔽 |
9楼2011-02-16 08:44:12
简单回复
?磭Y壹笑8楼
2011-02-16 08:19
nancy1984(金币+1): 2011-02-16 12:22:10
