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zycly86

铜虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】半定量RT-PCR中摸索循环数是以哪个样品为准

看见虫友“三磷酸腺苷”说半定量要摸一个最佳循环数，以跑胶刚好能看见为宜

我有一个疑惑
如果我想做半定量比较诱导表达处理不同时间的基因表达量，那摸索循环数是以哪个样品的条带为准呢？比如样品有ABA处理0h 1h　２ｈ　３ｈ　４　ｈ　５ｈ　，我摸索循环数该以哪个时间为准呢？毕竟不同样品的目的基因的表达量不同，模板量也不同

望指点

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1楼 2011-01-23 17:31:11

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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
zycly86(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-23 22:26:55

这种情况以中间那个为准，然后往上加一两个循环
其实如果真要做这么细致的实验，还不如做定量
半定量只能看个大概的趋势而已

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2楼2011-01-23 17:35:21

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zycly86

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rainwander: 小木虫可以传照片的，但是要求图片＜500kb。 2011-01-23 22:28:22

引用回帖:

Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-23 17:35:21:
这种情况以中间那个为准，然后往上加一两个循环
其实如果真要做这么细致的实验，还不如做定量
半定量只能看个大概的趋势而已

我想把试验彻底弄明白，其实老板也让做定量的，半定量确实只是个参考。不知道为什么小木虫不能上传照片，我只能发在丁香园上，能请您帮忙看一下如果是这个试验的话，应该选多少循环http://www.dxy.cn/bbs/topic/19288080?tpg=1&age=0

[ Last edited by zycly86 on 2011-1-23 at 18:38 ]

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3楼2011-01-23 17:42:23

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yucheng9255

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★ ★
zycly86(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流！ 2011-01-23 19:55:29

引用回帖:

Originally posted by zycly86 at 2011-01-23 17:42:23:

我想把试验彻底弄明白，其实老板也让做定量的，半定量确实只是个参考。不知道为什么小木虫不能上传照片，我只能发在丁香园上，能请您帮忙看一下如果是这个试验的话，应该选多少循环[url]http://www.dxy.cn/ ...

内参的循环数不一定要和目的基因一样，都要选择上升期的中间数作为最佳循环数. 所以你丁香园那个图目的基因以33 内参是30

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4楼2011-01-23 19:50:38

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