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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】引物的Tm值设计有上限吗？
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ycyqh

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】引物的Tm值设计有上限吗？ 已有3人参与

引物退火温度50-60度，taq酶延伸温度72度，那么taq酶延伸的时候部分引物岂不是已经熔开？我也做过一些pcr，但没有想过这个问题，请各位高人帮忙解答。
  我看到有人说引物Tm值不要超过72度，这是为什么呢，我觉得引物Tm值高于72度，Taq酶扩增时引物仍牢牢结合，岂不是很好，请各位大侠帮小弟指点迷津：）
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1楼 2011-01-17 22:53:23
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1): 欢迎多来交流 2011-01-18 08:59:30
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-17 22:58:38:
神马引物会超过72呢？
好吧，假设有个超级长的引物，72度的时候足以自身形成二级结构，哦耶~

你明白了吧~

不过也不是没有办法应付，就是采用缓慢降温来实现退火，不过这样做一次PCR实在太坑die了……

前几天 有个帖子 的 tm 是90多度。  40bp的引物。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-01-17 23:42:36
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1): 哈哈，这解释~~~N~~ 2011-01-17 23:48:20
神马引物会超过72呢？
好吧，假设有个超级长的引物，72度的时候足以自身形成二级结构，哦耶~

你明白了吧~

不过也不是没有办法应付，就是采用缓慢降温来实现退火，不过这样做一次PCR实在太坑die了……
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-01-17 22:58:38
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QIAO4984

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1): 感谢分享经验。 2011-01-18 08:59:12
Tm这个东西  个人觉得还是不准的  

所以一般都不怎么注意    扩增大片段5K的时候  有时会看看
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3楼2011-01-17 23:22:41
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1): 鼓励交流 2011-01-18 08:59:46
引用回帖:
Originally posted by yixuanwin at 2011-01-17 23:42:36:



前几天 有个帖子 的 tm 是90多度。  40bp的引物。

用来做定点突变的那种mega primer 吧
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-01-17 23:46:41
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