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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】又硫酸铵沉淀问题
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chaoen

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】又硫酸铵沉淀问题

本人最近在做蛋白质的沉淀，同时用目的纯化酶和粗酶液做的。
发现纯化酶在沉淀时，活力大部分在30%-40%中，部分存在在40%-50%中。我想请问大家那是不是意味着我用粗酶液做的话，目的酶也应该大部分在30-40%中呢？因为酶活测定粗酶液时，有其他污染酶干扰。没法测出可靠的酶活。
谢谢！
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1楼 2011-01-15 05:57:34
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DH5a

银虫 (小有名气)
★
rainwander(金币+1):鼓励新虫积极参与交流~~~ 2011-01-15 17:26:19
chaoen(金币+1): 2011-01-18 19:02:47
粗酶液大部分在30%-40%中，建议你吧这个范围内的硫酸铵的浓度在细化。
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3楼2011-01-15 15:07:46
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
dhd997(金币+2):谢谢交流 2011-01-15 10:22:10
chaoen(金币+1): 2011-01-18 19:02:40
应该是的
个人觉得你还是可以优化一下硫酸铵浓度的
你先做一个梯度20-60
然后选你正好出现酶活性的那个浓度再加上10即为你的实验硫酸铵浓度
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2楼2011-01-15 10:05:19
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★
rainwander(金币+1):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-15 17:26:09
chaoen(金币+2): 2011-01-18 19:02:54
chaoen(金币+1): 2011-04-25 19:25:45
纯酶和粗酶液有以下区别：蛋白质浓度、pH值及缓冲体系、盐离子种类和浓度、蛋白质互作、做硫酸铵沉淀预备实验的体系和具体操作。

反正就是别想着这个是这样那个也还是那样就行了，该做的预备实验不能免。最好的情况是粗酶和纯酶的沉淀行为一致，但那只是可能性之一。
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4楼2011-01-15 16:15:27
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chaoen

木虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1): 欢迎继续交流，可在一楼编辑问题，也可引用回复，方便虫友帮你解答，另外回答合适的你都悬赏金币是不是也要发下？ 2011-01-17 09:23:06
感谢楼上的朋友回复
另外我想请问是否可以做SDS-PAGE, 来判断目的酶有没有被沉淀下来
大家通常会不会这么做呢？
谢谢
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5楼2011-01-17 02:14:49
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