应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】重叠PCR问题
51/1返回列表
查看: 2059  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

shourjruo

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】重叠PCR问题

将500bp的片段与4000bp的片段进行连接的重叠PCR实验。中间引物设计没有问题，单独两片段PCR没有问题，并使用高保真不加A的taq酶，然后将两片段混合后在不加引物的情况下（其他按正常PCR体系添加）进行10轮PCR（40度退火），取这次PCR样品为模板进行正常PCR扩增，但总是得不到目的片段。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-01-13 09:34:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

魑魅-魍魉

新虫 (正式写手)
shourjruo(金币+1): 2011-01-15 13:40:39
shourjruo(金币+1): 2011-04-26 11:02:28
重叠区40BP你四十退火？ 温度低了吧
赞一下 回复此楼
7楼2011-01-15 12:10:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)
★ ★
最爱花诗雨(金币+2):鼓励交流 2011-01-13 15:50:34
shourjruo(金币+1): 2011-01-14 19:38:35
不知道你得配对区总共有多长，至少要保证20bp吧，是不是你得配不上啊。。。
感觉你不加引物的那次pcr是多余的，直接两个片段和上下游引物pcr就没问题
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-01-13 15:48:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★
rainwander(金币+2):鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-13 17:36:30
shourjruo(金币+1): 2011-01-14 19:39:00
不用等10轮后再加引物了，直接加入全长的上下游引物，一下扩三十个循环。或者大量扩增两个片段，回收后直接混合，加入pcr反应体系后扩20个循环。

不管哪种建议反应结束后再使用可以加A的聚合酶处理，使外端加入A，链接T载体，使用菌落pcr大量筛选克隆。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-01-13 16:27:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shourjruo

铜虫 (小有名气)
谢谢！重叠区域有40bp
赞一下 回复此楼
4楼2011-01-14 19:42:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085410 273求调剂 +7 X1999 2026-04-09 7/350 2026-04-11 21:13 by 蓝云思雨
[考研] 考研求调剂 +3 ban班小七 2026-04-11 3/150 2026-04-11 20:48 by may_新宇
[考研] 材料工程281还有调剂机会吗 +14 xaw. 2026-04-11 14/700 2026-04-11 20:46 by 蓝云思雨
[考研] 电子信息270求调剂 +14 terminal469 2026-04-07 14/700 2026-04-11 19:44 by laoshidan
[考研] 299求调剂 +7 ZVVZ13 2026-04-08 7/350 2026-04-11 11:54 by zhq0425
[考研] 283求调剂，工科！ +12 苏打水7777 2026-04-08 12/600 2026-04-11 10:28 by 逆水乘风
[考研] 275求调剂 +9 1624447980 2026-04-08 10/500 2026-04-11 10:20 by Delta2012
[考研] 化学工程与技术324调剂 +23 孙常华 2026-04-09 25/1250 2026-04-11 00:07 by 骑牛渡寒江
[考研] 一志愿211，化学310分，本科重点双非，求调剂 +23 努力奋斗112 2026-04-08 23/1150 2026-04-10 23:29 by 314126402
[考研] 人工智能320调剂08工类还有机会吗 +11 振—TZ 2026-04-10 11/550 2026-04-10 21:51 by blankyung
[考研] 265求调剂 +12 风说她早忘了 2026-04-10 13/650 2026-04-10 18:56 by chemisry
[考研] 机械还有还有名额吗？太难了 +6 笑笑袁 2026-04-10 6/300 2026-04-10 11:54 by 高维春
[考研] 求调剂 材料与工程 324分 专硕 +19 翩翩一书生 2026-04-10 21/1050 2026-04-10 11:41 by wp06
[论文投稿] 求助文献原文 10+3 18500821399 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:56 by 北京莱茵润色
[考研] 293分求调剂，外语为俄语 +7 加一一九 2026-04-07 10/500 2026-04-08 20:14 by yutian743
[考研] 275 求调剂 +8 Lei812514 2026-04-07 8/400 2026-04-08 12:46 by chemisry
[考研] 计算机11408 287 求调剂 +3 LiLe5 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:15 by shanqishi
[考研] 071000生物学，一志愿深圳大学296分，求调剂 +12 TIckLw 2026-04-06 13/650 2026-04-07 20:34 by lijunpoly
[考研] 085602调剂 初试总分335 +10 19123253302 2026-04-05 10/500 2026-04-07 15:23 by 小乔同学ya
[考研] 求调剂到材料 +5 程9915 2026-04-06 5/250 2026-04-06 15:21 by yulian1987
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭