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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】P不出正确条带
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asdfghjkl-00

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】P不出正确条带

我设计的引物是900的，但是在750出来了一个，500出来了一个，我P 了好几次，否没有得到正确条带，请问是怎么回事啊？是反映条件的问题还是引物问题？如果是反映条件的问题，该如何改进？如果是引物的问题，有没有什么办法可以验证引物的正确性啊？
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1楼 2011-01-08 11:13:50
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qujinyan123

金虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):good 2011-01-08 17:09:23
出现非特异性条带，首先要考虑的是引物的问题，引物设计是不是合理。是否进行了同源性检查。
   第二，就是反应体系的问题，各组分的浓度问题，比如如果dNTP加入太多，也会引起非特异性条带，你可以重新优化一下反应体系。
   第三，就是退火温度，可以多做几个梯度温度试一下。
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5楼2011-01-08 16:51:32
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天使托

专家顾问 (职业作家)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流 2011-01-08 14:49:41
你的问题的确很多，可以看看版内的引物设计专题，另外看看自己的引物设计的是否合适；再看看反应的体系，可以改变反应体系！
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2楼2011-01-08 14:45:10
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pxhcooh

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
asdfghjkl-00(金币+1): 2011-01-09 09:21:46
你把你的引物设计信息给大家看看 或许会有答案
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3楼2011-01-08 14:49:09
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zx1984

木虫 (正式写手)
★
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2011-01-08 16:02:52
引物、模板、时间、温度，好好查查
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4楼2011-01-08 15:18:06
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