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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于限制性内切酶的疑问？
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】关于限制性内切酶的疑问？ 已有5人参与

各位虫虫好，大家在进行重组载体构建的过程中有没有遇到以下问题，载体进行双酶切与目的片段进行连接后，酶切鉴定的时候发现，用于连接以外的其他酶切位点（载体中）进行酶切时居然无法切开，奇怪啊。
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1楼 2010-12-28 15:20:25
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feilr

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-29 17:30:30
我推荐你将你的质粒重新检查一下，看看是不是序列出了问题，你可以在网上下载NoeClone这个软件进行观察一下，说不定对你有一定的帮助
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6楼2010-12-29 14:08:20
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sanmaoecho

金虫 (小有名气)
★
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没遇到过，会不会酶活性的问题？
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我们对於那份面向未来的勇气，过於渴求而被过去所迷惑
2楼2010-12-28 15:42:03
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-29 17:30:19
1.map有问题
2.酶可能是甲基化敏感的，
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-12-28 16:24:36
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1):鼓励交流！ 2010-12-28 19:39:17
楼主说的问题看的不是很明白，进行验证的时候只需要用当时进行设计时候的双酶切位点的酶进行双酶切就可以了。然后可以点两个对照，如果大小正确那就对了，不过可以先进行pcr验证，然后提取充足质粒，进行酶切验证。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2010-12-28 17:46:35
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