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Cell Culture and Determination of Cytotoxicity. Metabolically active H4IIE rat hepatoma cells were grown in Dulbecco’s modified Eagle’s medium (4.5 g/L glucose, 2 mmol/L L-glutamine, 100 units/mL penicillin, 100 µg/mL streptomycin, and 10% fetal bovine serum)in a humidified atmosphere (37 °C, 5% CO2). The effect of isolated compounds on cell viability was determined using the MTT assay. The cells were plated in 96-multiwell plates with 10 000 cells/well.The cells were allowed to attach for 24 h and then treated with different concentrations of the compounds for 24 h. After this treatment the medium was changed and the cells were incubated for 3 h under cell culture conditions with 0.7 mg/mL MTT. After this incubation the cells were lysed with 50% EtOH/49% H2O/1% HOAc. The concentration of reduced MTT as a marker for cell viability was measured at 560 nm. Data are given as mean SEM of at least three independent experiments. The significance of changes in the test responses was assessed using a one-way ANOVA followed by LSD test (Analyze-it, Leeds, UK); differences were considered significant at P 0.05. |
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dhd997(金币+5):意思对了。辛苦 2010-12-25 16:00:40
chzhbin(金币+25):呵呵 非常感谢 不错 我还有一个帖子 那个是30个金币 呵呵 2010-12-25 16:09:37
1949stone(金币+1):鼓励 2010-12-25 19:14:40
dhd997(金币+5):意思对了。辛苦 2010-12-25 16:00:40
chzhbin(金币+25):呵呵 非常感谢 不错 我还有一个帖子 那个是30个金币 呵呵 2010-12-25 16:09:37
1949stone(金币+1):鼓励 2010-12-25 19:14:40
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细胞培养和细胞毒性检测： 取增长期的 H4IIE 的鼠肝癌细胞，用DMEM培养基培养（含4.5 g/L 的葡萄糖，2 mmol/L的谷酰胺，100单位的青霉素钠，100mg/ml的链霉素以及10%的胎牛血清），于37 °C, 5% CO2的培养箱中孵育。用MTT法测定分离的化合物对细胞活力的影响。 先将细胞铺于96孔板中，10000个/孔，24小时后，加入不同浓度的化合物，继续孵育24h。加入0.7mg/ml的MTT，换液，细胞于培养条件下继续孵育3h，加入50% 乙醇/49% 水/1% HOAc溶解（形成的甲瓒颗粒）。于560nm处检测，MTT降低的浓度作为细胞活力的标志，数据是至少三次独立试验的统计结果，采用ANOV方差检验来分析数据间是否具有统计学差异。p值小于0.05被定义为有显著性。 英语不太好，有些事意译，你凑合看吧。你要是需要MTT法检测细胞增殖之类的方法，我可以给你 |
2楼2010-12-25 15:56:10
3楼2010-12-25 16:40:49
4楼2010-12-25 20:44:18
