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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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feiye2214

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】BLAST之后,怎么拿全序列啊? 已有5人参与

从头说起,我想获得目的物种的beta-actin基因全序列,以一些相近物种的同源序列(mRNA完整片段)设计引物,以目的物种的基因组DNA为模板,获得了一条853bp的序列,经BLAST之后,与人类9号染色体上的片段相似度78%,与小鼠的:Mus musculus actin, beta, cytoplasmic (Actb), mRNA  Length=1891,覆盖率96%,相似度83%;
还有一个:PREDICTED: Mus musculus similar to gamma actin-like protein (LOC667260),  misc RNA Length=1313,覆盖率96%,相似度83%,这个“similar to gamma actin-like protein ”是说什么蛋白啊?

与相近物种比对之后,有基因DNA序列的,也有mRNA序列的,覆盖率、相似度都在百分之八九十!

为什么我用的是DNA进行扩增的,序列为什么跟mRNA同源性那么高啊?中间不是应该有内含子吗?还是850bp不够长?都处在外显子了??

进一步的问题:小弟想搞到这个beta-actin基因全序列,是不是以这个获得的850bp的序列为设计区段,设计引物向两头扩增?染色体步移是不是就是说这个情况?高手给点指导哈。

[ Last edited by feiye2214 on 2010-12-25 at 14:41 ]
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2楼2010-12-25 10:30:30
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rioarsenal

金虫 (正式写手)

什么物种?原核还是真核
3楼2010-12-25 10:48:43
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feiye2214

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2010-12-25 10:48:43:
什么物种?原核还是真核

真核,头足类。
4楼2010-12-25 10:57:40
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rioarsenal

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-26 08:56:53
真核啊,想做全序列,要做RACE的
5楼2010-12-25 11:08:59
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feiye2214

木虫 (正式写手)

给自己的帖子顶一下
6楼2010-12-25 16:17:31
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haitian0625

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+3):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-12-25 23:29:48
做BLAST时,会自动比对你的基因序列与他物种已知的mRNA序列,一般会是正负(链)的关系;
PCR测序时,是否可以根据相邻外显子(保守性高)设计引物扩增出内含子呢?
你说的向两头,是反义PCR,应该可以试试;
染色体步移是逐步缩小区间的目的基因定位方法。
7楼2010-12-25 16:32:34
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lwzxl007

木虫 (小有名气)

小弟的帖子,顶了
8楼2010-12-25 21:52:03
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