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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 金属生物材料 » 【求助】细胞培养中金属圆片试样的尺寸小于培养板孔径尺寸怎么办？
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westlover

银虫 (著名写手)

[交流] 【求助】细胞培养中金属圆片试样的尺寸小于培养板孔径尺寸怎么办？

打算做细胞试验，但是培养板孔径尺寸比试样大，试样放进去后留有很大的间隙，教授说，细胞会自动选择位置较低的地方聚集，也就是说，细胞会慢慢迁移到间隙中去，那样的话，细胞附着、细胞增殖的数据就不准了，怎么办呢？
培养板是标准24孔，孔径不能变小，金属试样是委托企业加工的，也不好改尺寸，请问大家有什么好办法吗？
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1楼2010-12-24 08:31:57
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firebolt

铁杆木虫 (著名写手)
★
westlover(金币+5):谢谢。 2010-12-24 09:53:45
shileinjut(金币+1):谢谢参与！ 2010-12-24 12:07:00
问题不大，我们做凝胶上细胞增值的时候试样也是要比孔板小一些的，你可以等细胞贴壁之后将试样转移到新的孔里，48孔板能放进你的试样吗
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2楼2010-12-24 08:53:25
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westlover

银虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by firebolt at 2010-12-24 08:53:25:
问题不大，我们做凝胶上细胞增值的时候试样也是要比孔板小一些的，你可以等细胞贴壁之后将试样转移到新的孔里，48孔板能放进你的试样吗

试样的直径是15mm，24孔的孔径是15.6mm，48孔的板子孔径就太小了。
也就是说，种植的时候细胞悬浮液的浓度要尽量大，液滴要尽量小是吗？
要等多长时间才能转移到新孔里呢?
此外，我要测量种植1小时、3小时、7小时后的贴壁数量，如果那样的操作的话，是不是就不行啦？
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3楼2010-12-24 09:57:49
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westlover

银虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by firebolt at 2010-12-24 08:53:25:
问题不大，我们做凝胶上细胞增值的时候试样也是要比孔板小一些的，你可以等细胞贴壁之后将试样转移到新的孔里，48孔板能放进你的试样吗

有个实验室的办法是：提高悬浮液的细胞浓度，保证每孔种植细胞数量的前提下，先滴在试样中心滴大概70μL悬浮液，这样，悬浮液会完全覆盖试样，但不会流出去。在CO2培养箱中静置30分钟后，再向孔中加入930μL培养液。他们一直使用这种方法，不知可取不？

[ Last edited by westlover on 2010-12-24 at 12:53 ]
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4楼2010-12-24 12:48:06
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dj04164

木虫 (正式写手)
★
westlover(金币+5):谢谢！ 2010-12-24 15:40:46
yusen_1982(金币+1):欢迎讨论！ 2010-12-24 17:32:48
不知道你用的是什么细胞，大部分贴壁细胞会不在贴壁后1-7小时迁移太多如果你的样品有一定厚度，对细胞来说从样品上下来就更困难了。
这样做，先把细胞悬液配好，浓度即为培养细胞浓度。24孔板每孔1ml缓缓加入即可
不同细胞贴壁时间差异很大。细胞一般在贴壁后若干小时开始细胞周期。你可以先试试看，种在dish里隔半个小时观察一下，会看到悬浮〉下沉〉贴壁开始（圆形）〉完全贴壁〉伪足伸出。测试细胞周期就需要首先对其同步化，分不同时间点收集数据。
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5楼2010-12-24 14:50:07
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westlover

银虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by dj04164 at 2010-12-24 14:50:07:
不知道你用的是什么细胞，大部分贴壁细胞会不在贴壁后1-7小时迁移太多如果你的样品有一定厚度，对细胞来说从样品上下来就更困难了。
这样做，先把细胞悬液配好，浓度即为培养细胞浓度。24孔板每孔1ml缓缓加入即可 ...

谢谢！我打算用鼠MC3T3-E1细胞，一种osteblast-like细胞，是贴壁细胞。我们的试样厚度是1.0mm。
呵呵，我仔细问了下教授，他真正担心的是，培养板的细胞附着性能很好，如果将悬浮液直接注入孔中，大量的细胞会附着在孔壁而不是试样上……，他的担心是不是多余的？我没有发现任何文章讨论间隙以及培养板孔壁吸引细胞的问题的，不过大部分文章都没有给出细胞种植的细节。
上面我提到的那个“droplet”方法有可行性吗？那么多细胞，那么少的培养液体积，密度太高了吧，细胞会不会死掉？

[ Last edited by westlover on 2010-12-24 at 15:54 ]
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6楼2010-12-24 15:46:05
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firebolt

铁杆木虫 (著名写手)
★
shileinjut(金币+1):谢谢参与！ 2010-12-25 00:39:46
westlover(金币+3): 2010-12-28 10:27:48
引用回帖:
Originally posted by westlover at 2010-12-24 15:46:05:


谢谢！我打算用鼠MC3T3-E1细胞，一种osteblast-like细胞，是贴壁细胞。我们的试样厚度是1.0mm。
呵呵，我仔细问了下教授，他真正担心的是，培养板的细胞附着性能很好，如果将悬浮液直接注入孔中，大量的细胞 ...

如果只是担心这个的话，问题不大，正常操作就行，0.6mm的缝隙没有什么关系
当然如果按照你上面提到的方法我相信没有问题
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7楼2010-12-24 21:30:35
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dj04164

木虫 (正式写手)
★
shileinjut(金币+1):谢谢参与！ 2010-12-25 00:39:39
westlover(金币+5):谢谢 2010-12-25 06:54:44
引用回帖:
Originally posted by westlover at 2010-12-24 15:46:05:


谢谢！我打算用鼠MC3T3-E1细胞，一种osteblast-like细胞，是贴壁细胞。我们的试样厚度是1.0mm。
呵呵，我仔细问了下教授，他真正担心的是，培养板的细胞附着性能很好，如果将悬浮液直接注入孔中，大量的细胞 ...

放心干吧，这个细胞我种过，迁移性极差，基本上就是不会动。trypsin的时候拿到新孔里面。不用担心
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8楼2010-12-24 23:31:37
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westlover

银虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by dj04164 at 2010-12-24 23:31:37:

放心干吧，这个细胞我种过，迁移性极差，基本上就是不会动。trypsin的时候拿到新孔里面。不用担心

谢谢啊！
那就是说，直接注入悬液就行吗？
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9楼2010-12-25 06:56:06
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dj04164

木虫 (正式写手)
★
yusen_1982(金币+1):欢迎讨论！ 2010-12-26 21:38:22
westlover(金币+2): 2010-12-28 10:27:25
引用回帖:
Originally posted by westlover at 2010-12-25 06:56:06:

谢谢啊！
那就是说，直接注入悬液就行吗？

对，种的时候注意，细胞要吹打均匀，不可有粘在一起的，不可有沉底的。用pipe一滴一滴加下去。加到板上就不能再吹了。种几个没样品的，看看效果咋样，平行和重复次数要大于3次
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10楼2010-12-26 11:06:28
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westlover

银虫 (著名写手)
谢谢大家帮忙！
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11楼2010-12-28 10:30:00
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