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tongxinkxy

银虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】原核表达羊基因,cDNA长度约为3kb,基因为一种有活性的酶

原核表达羊基因,cDNA长度约为3kb,基因为一种有活性的酶
请问是否原核表达就可以?
请问宿主菌或者其他方面有什么注意事项吗?
在原核表达时有什么注意事项吗?
目的序列已经有了,请问设计引物时,是从哪里开始设计引物呢?
谢谢解答,小女子不胜感激
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ben1147

木虫 (正式写手)


tongxinkxy(金币+2): 2010-12-21 13:55:55
tongxinkxy(金币+2): 2010-12-21 20:15:14
引用回帖:
Originally posted by tongxinkxy at 2010-12-21 08:43:51:

请问用酵母和细胞有什么区别?
哪个对实验室的要求比较高?

酵母是真核细胞,具有翻译后修饰机制,表达的蛋白和真实情况基本上一样
也可以用枯草芽孢杆菌表达系统,可以是表达产物高效的分泌到胞外,防止包涵体产生。
至于对实验室的要求貌似没什么区别,只要有相应的菌株和载体
9楼2010-12-21 09:01:35
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★ ★
amisking(金币+2):good! 2010-12-20 20:53:28
tongxinkxy(金币+1): 2010-12-20 23:10:15
一般从编码的第一个氨基酸开始设计引物
原核表达不一定可行的,偏爱密码子不一样,而且真核生物表达后修饰比较多,比如糖基化,原核生物没有这种功能。
2楼2010-12-20 20:05:33
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tongxinkxy

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2010-12-20 20:05:33:
一般从编码的第一个氨基酸开始设计引物
原核表达不一定可行的,偏爱密码子不一样,而且真核生物表达后修饰比较多,比如糖基化,原核生物没有这种功能。

是不是我确定目的蛋白翻译后加工确定有糖基化过程,就100%不能用原核表达呢?谢谢
3楼2010-12-20 20:18:29
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ben1147

木虫 (正式写手)


tongxinkxy(金币+1): 2010-12-20 23:10:00
tongxinkxy(金币+1):2 2010-12-21 13:55:30
引用回帖:
Originally posted by tongxinkxy at 2010-12-20 20:18:29:

是不是我确定目的蛋白翻译后加工确定有糖基化过程,就100%不能用原核表达呢?谢谢

不光糖基化,翻译后修饰很多种的,都要考虑一下。但是即使需要修饰也不一定不能做原核表达,也许只是活性上有差异而已。看你是要干什么用了,测酶学参数?做抗体?
4楼2010-12-20 22:20:38
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