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傻子

木虫 (正式写手)

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UDG法抑制污染的具体方法

最近实验室污染严重，简单的防止污染的方法基本没用了，看到有dUTP UNG/UDG法抑制污染，但都写的不清楚，所以有几点想请教下做过的朋友，还望赐教！谢谢！

1. 在已经出现污染的情况下，加入dUTP是否可以抑制污染，看到有说直接按比较加入dUTP就可以抑制污染，那原来存在的产物污染是不是也能被dUTP识别呢？

2. 类似问题1,在已经存在污染的条件下，使用该方法是否能完全抑制污染呢？UNG/UDG对无dUTP的链是无效的，那原来的污染是否会不再产生影响呢？

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1楼 2010-12-15 10:54:59

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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+6): good 2011-04-22 09:10:20

引用回帖:

Originally posted by sxxuan at 2011-04-21 15:40:06:
就是说把整个序列的T都换成U了。如果不行的话，那为什么用dUTP去防止污染？对后面的步骤都没影响？
还是只是在前面的步骤中加入，灭活后再用正常的PCR体系去扩？
啊，不懂啊怎么办啊！

UDG-UTP防污染的原理前面已经讲过

UTP不妨碍Taq合成“DNA” 双链，此时的DNA不是严格意义的DNA，是无法做克隆的
但是作为SYBR Green嵌入的双链是可以的

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8楼2011-04-21 23:25:36

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查看全部 11 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
傻子(金币+2):谢谢指点 2010-12-15 12:36:39
dhd997(金币+2):依旧很热心，鼓励 2010-12-15 15:38:18

这个方法的原理是使用dUTP替代dNTP，在非PCR条件下，比如在混PCR体系的时候，一些非特异扩增如果进行，就会引入dUTP。然后在正式上PCR机器的时候，第一步反应是50℃孵育，让UDG酶充分反应，去掉那些非特异扩增。然后预变性94度的时候，就把UDG酶失活了

像你说的污染，应该是实验室洁净度的问题了……解决方法很简单。台面、枪什么的擦干净，用酒精再擦一次。然后照紫外，半小时就够了。枪头高压灭菌。

还有就是你的试剂是不是污染了……污染了就换新的吧

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2楼2010-12-15 12:22:09

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sxxuan

金虫 (著名写手)

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虫号: 512865

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1949stone: 可以直接pm 2011-04-21 10:07:23

引用回帖:

Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-15 12:22:09:
这个方法的原理是使用dUTP替代dNTP，在非PCR条件下，比如在混PCR体系的时候，一些非特异扩增如果进行，就会引入dUTP。然后在正式上PCR机器的时候，第一步反应是50℃孵育，让UDG酶充分反应，去掉那些非特异扩增。然 ...

我想问一下啊，我们用dUTP代替了dNTP，对后面的连接和转化有没有影响？最近我们做的克隆都是阴性，郁闷

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3楼2011-04-21 09:42:40

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