24小时热门版块排行榜

返回列表

baisuilan

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 690.2
帖子: 372
在线: 22.7小时
虫号: 400723

[交流] 【求助/交流】双荧光素酶报告系统出现几个问题，求解答，谢谢。

我使用Hela细胞系，利用siRNA和pcDNA4表达质粒，研究抑制或过表达目的基因A对CBF启动子的作用。利用脂质体lipo2000共转染，报告基因质粒是pGL2-CBF-Luc，并且用含突变CBF启动子的报告质粒做阴性对照报告质粒，内参是pRL-TK海肾荧光素酶表达质粒。
过表达A基因之后，无论正常报告质粒还是突变体报告质粒，萤火虫荧光素酶的强度都降低（比转空质粒的对照低50%左右），而内参海肾荧光素酶强度也同样变低。请问这是何故？
突变体的报告质粒应该不受目的基因A的影响。计算fLuc/rLuc比值后发现，正常报告基因质粒的相对表达量比对照高30%左右，突变体报告基因相对表达量则没变化。
请问，目的基因A对于CBF启动子起抑制作用还是增强作用？
之前使用293T细胞系，过表达目的基因A之后fLuc也明显降低，但rLuc有时候明显降低，有时候不变。
请问我的实验数据可信吗？我是否需要改变实验条件？

回复此楼

» 猜你喜欢

GSPT1口服分子胶降解剂MRT-2359 | Biochempartner 已经有0人回复
碳青霉烯类抗生素为何需联用西司他丁钠？ | Biochempartner 已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有86人回复
源自蕨类植物的抗炎美白活性分子去甲氧基荚果蕨素 | Biochempartner 已经有0人回复
肠道里的"代谢开关"：Fexaramine用肠道限制性重新定义 FXR 激动剂已经有0人回复
DMXAA：从血管破坏剂到STING通路研究的关键工具分子 | Biochempartner 已经有0人回复
靶向PD-L1的人源化单克隆抗体阿特珠单抗已经有0人回复
"探针之父"(+)-JQ-1如何改变表观遗传研究 | Biochempartner 已经有0人回复
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松已经有0人回复
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析已经有0人回复
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2010-12-12 19:43:12

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

右岸晴雨

铜虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 93.5
帖子: 8
在线: 3.8小时
虫号: 971988

最近我想克隆荧光素酶基因，可以向您要些质粒作为模版用吗

赞一下

回复此楼

2楼2010-12-21 11:00:57

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

Frank王

铜虫 (初入文坛)

应助: 8 (幼儿园)
金币: 82.6
帖子: 20
在线: 14.9小时
虫号: 1177599

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

1楼: Originally posted by baisuilan at 2010-12-12 19:43:12:
我使用Hela细胞系，利用siRNA和pcDNA4表达质粒，研究抑制或过表达目的基因A对CBF启动子的作用。利用脂质体lipo2000共转染，报告基因质粒是pGL2-CBF-Luc，并且用含突变CBF启动子的报告质粒做阴性对照报告质粒，内参 ...

请问有PRL-TK和pMIR-REPORT™
β-gal Control Plasmid载体的序列吗？

赞一下(1人)

回复此楼

3楼2011-12-30 21:29:44

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖