应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】双荧光素酶报告系统出现几个问题，求解答，谢谢。
51/1返回列表
查看: 3619  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

baisuilan

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】双荧光素酶报告系统出现几个问题，求解答，谢谢。

我使用Hela细胞系，利用siRNA和pcDNA4表达质粒，研究抑制或过表达目的基因A对CBF启动子的作用。利用脂质体lipo2000共转染，报告基因质粒是pGL2-CBF-Luc，并且用含突变CBF启动子的报告质粒做阴性对照报告质粒，内参是pRL-TK海肾荧光素酶表达质粒。
过表达A基因之后，无论正常报告质粒还是突变体报告质粒，萤火虫荧光素酶的强度都降低（比转空质粒的对照低50%左右），而内参海肾荧光素酶强度也同样变低。请问这是何故？
突变体的报告质粒应该不受目的基因A的影响。计算fLuc/rLuc比值后发现，正常报告基因质粒的相对表达量比对照高30%左右，突变体报告基因相对表达量则没变化。
请问，目的基因A对于CBF启动子起抑制作用还是增强作用？
之前使用293T细胞系，过表达目的基因A之后fLuc也明显降低，但rLuc有时候明显降低，有时候不变。
请问我的实验数据可信吗？我是否需要改变实验条件？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-12-12 19:43:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

右岸晴雨

铜虫 (初入文坛)
最近我想克隆荧光素酶基因，可以向您要些质粒作为模版用吗
赞一下 回复此楼
2楼2010-12-21 11:00:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Frank王

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1楼: Originally posted by baisuilan at 2010-12-12 19:43:12:
我使用Hela细胞系，利用siRNA和pcDNA4表达质粒，研究抑制或过表达目的基因A对CBF启动子的作用。利用脂质体lipo2000共转染，报告基因质粒是pGL2-CBF-Luc，并且用含突变CBF启动子的报告质粒做阴性对照报告质粒，内参 ...

请问有PRL-TK和pMIR-REPORT™
β-gal Control Plasmid载体的序列吗？
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-12-30 21:29:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

here0009

银虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主你好，我也出现了这个问题，不过我的是萤火虫和海参的荧光值都怎大了，我也在苦恼怎么办呢。想试一下调整质粒量的比例。你的问题解决了吗
赞一下 回复此楼
4楼2013-03-18 11:16:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

玉兔Jane

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主你的问题解决了吗？我也是用海肾荧光素酶作的内参，萤火虫荧光素酶变了，可是海肾荧光素酶也变了。
赞一下 回复此楼
5楼2016-03-26 16:03:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 baisuilan 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +13 不知道叫什么！ 2026-03-15 15/750 2026-03-17 07:43 by laoshidan
[考研] 286求调剂 +3 lemonzzn 2026-03-16 5/250 2026-03-16 20:43 by lemonzzn
[考研] 环境工程调剂 +6 大可digkids 2026-03-16 6/300 2026-03-16 17:16 by barlinike
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 085600调剂 +5 漾漾123sun 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:58 by 漾漾123sun
[考研] 0703化学调剂，求各位老师收留 +8 秋有木北 2026-03-14 8/400 2026-03-16 15:21 by 哦哦123
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家，不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中农业大学071010，总分三百二,求调剂 +3 困困困困坤坤 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:35 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 抓着星星的女孩 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:47 by userper
[考研] 285 求调剂 资源与环境 一志愿北京化工大学 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:04 by JourneyLucky
[考研] 【考研调剂求收留】 +3 Ceciilia 2026-03-11 3/150 2026-03-13 20:18 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-12 5/250 2026-03-13 18:31 by ms629
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 0856化工原理 +6 z2839474511 2026-03-10 6/300 2026-03-13 10:41 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭