24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 3643  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

baisuilan

金虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】双荧光素酶报告系统出现几个问题,求解答,谢谢。

我使用Hela细胞系,利用siRNA和pcDNA4表达质粒,研究抑制或过表达目的基因A对CBF启动子的作用。利用脂质体lipo2000共转染,报告基因质粒是pGL2-CBF-Luc,并且用含突变CBF启动子的报告质粒做阴性对照报告质粒,内参是pRL-TK海肾荧光素酶表达质粒。
过表达A基因之后,无论正常报告质粒还是突变体报告质粒,萤火虫荧光素酶的强度都降低(比转空质粒的对照低50%左右),而内参海肾荧光素酶强度也同样变低。请问这是何故?
突变体的报告质粒应该不受目的基因A的影响。计算fLuc/rLuc比值后发现,正常报告基因质粒的相对表达量比对照高30%左右,突变体报告基因相对表达量则没变化。
请问,目的基因A对于CBF启动子起抑制作用还是增强作用?
之前使用293T细胞系,过表达目的基因A之后fLuc也明显降低,但rLuc有时候明显降低,有时候不变。
请问我的实验数据可信吗?我是否需要改变实验条件?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

here0009

银虫 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主你好,我也出现了这个问题,不过我的是萤火虫和海参的荧光值都怎大了,我也在苦恼怎么办呢。想试一下调整质粒量的比例。你的问题解决了吗
4楼2013-03-18 11:16:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

右岸晴雨

铜虫 (初入文坛)


最近我想克隆荧光素酶基因,可以向您要些质粒作为模版用吗
2楼2010-12-21 11:00:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Frank王

铜虫 (初入文坛)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
1楼: Originally posted by baisuilan at 2010-12-12 19:43:12:
我使用Hela细胞系,利用siRNA和pcDNA4表达质粒,研究抑制或过表达目的基因A对CBF启动子的作用。利用脂质体lipo2000共转染,报告基因质粒是pGL2-CBF-Luc,并且用含突变CBF启动子的报告质粒做阴性对照报告质粒,内参 ...

请问有PRL-TK和pMIR-REPORT™
β-gal Control Plasmid载体的序列吗?
3楼2011-12-30 21:29:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

玉兔Jane

新虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主你的问题解决了吗?我也是用海肾荧光素酶作的内参,萤火虫荧光素酶变了,可是海肾荧光素酶也变了。
5楼2016-03-26 16:03:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 339求调剂 +3 zjjkt 2026-03-31 3/150 2026-03-31 20:34 by 83503孙老师
[考研] 267求调剂 +7 uiybh 2026-03-31 7/350 2026-03-31 20:32 by 一切OK
[考研] 0710生物学求调剂! +5 叙述文 2026-03-31 5/250 2026-03-31 17:32 by 唐沐儿
[考研] 343求调剂 +8 爱羁绊 2026-03-28 8/400 2026-03-31 16:12 by 不吃魚的貓
[考研] 生物学 296 求调剂 +7 朵朵- 2026-03-26 9/450 2026-03-31 14:26 by jp9609
[考研] 调剂310 +13 温柔的晚安 2026-03-25 14/700 2026-03-31 13:03 by 记事本2026
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +6 hanamiko 2026-03-30 6/300 2026-03-31 12:19 by 唐沐儿
[考研] 293分求调剂,外语为俄语 +5 加一一九 2026-03-31 5/250 2026-03-31 09:39 by zhshch
[考研] 吉大生物学326分求调剂 +3 sunnyupup 2026-03-31 3/150 2026-03-31 09:28 by longlotian
[考研] 370求调剂 +3 080700调剂 2026-03-30 3/150 2026-03-31 01:09 by A_Zhe
[考研] 317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求调剂 +12 芋泥小铃铛 2026-03-28 12/600 2026-03-30 17:06 by wangjy2002
[考研] 310求调剂 +10 争取九点睡 2026-03-30 10/500 2026-03-30 16:45 by ztnimte
[考研] 329求调剂 +10 钮恩雪 2026-03-25 10/500 2026-03-29 13:32 by peike
[硕博家园] 招收生物学/细胞生物学调剂 +4 IceGuo 2026-03-26 5/250 2026-03-29 01:25 by griffith2014
[考研] 一志愿南京航空航天大学材料学硕求调剂 +3 @taotao 2026-03-28 3/150 2026-03-28 10:26 by JourneyLucky
[考研] 285求调剂 +4 AZMK 2026-03-27 7/350 2026-03-27 20:59 by AZMK
[考研] 305求调剂 +5 哇卢卡库 2026-03-26 5/250 2026-03-27 14:01 by laoshidan
[考研] 一志愿郑大085600,310分求调剂 +5 李潇可 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:14 by 不吃魚的貓
[考研] 中国科学院深圳先进技术研究院-光纤传感课题组招生-中国科学院大学、深圳理工大学联培 +5 YangTyu1 2026-03-26 5/250 2026-03-26 18:27 by 猫咪猫咪呀
[考研] 085602化学工程求调剂。 +4 平乐乐乐 2026-03-26 4/200 2026-03-26 17:57 by fmesaito
信息提示
请填处理意见