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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】分离培养后如何判断是纯菌？
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ycj0746

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】分离培养后如何判断是纯菌？ 已有13人参与

分离培养后如何判断是纯菌？直接将菌液送检测序通常测序出来含有杂合体或者说是菌液不纯，反复划线挑单菌后镜检形态均一致，但就是测序测不出来。如何判断纯或不纯啊？有没准确点的指标，而不是说眼睛看就行。
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1楼 2010-12-11 17:36:46
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ycj0746

银虫 (小有名气)
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Originally posted by xuanxuankaoyan at 2010-12-11 18:31:09:
直接菌液PCR看条带

如何看？ PCR扩出来的都是相同长度的片段，琼脂糖胶上反映出来的都是同一个位置，只有在测序的时候才能显示纯或者不纯。
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8楼2010-12-19 18:58:26
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ycj0746

银虫 (小有名气)
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Originally posted by yangjun130 at 2010-12-12 08:57:46:
可以用稀释涂布的方法，多涂布几次，然后挑选你要的菌落划线在富集培养，若仍不存，可重复多次，直至纯化

我也知道反复纯化，但是我的问题是如何判断是否已经纯了？
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9楼2010-12-19 19:00:12
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ycj0746

银虫 (小有名气)
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Originally posted by girlfisher at 2010-12-12 10:42:58:
测序测不出是说有杂信号还是没信号还是其他原因?

是杂合体存在或者模板不纯的原因。
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10楼2010-12-19 19:01:22
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ycj0746

银虫 (小有名气)
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Originally posted by 柚柚海风 at 2010-12-12 20:17:31:
我们一般都是镜检  呵呵 测序还没有上呢

镜检很主观的，即使形态一致也并不能说明已经纯了。
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11楼2010-12-19 19:02:42
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ycj0746

银虫 (小有名气)
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Originally posted by hampc at 2010-12-12 20:48:35:
转种于血平板上及其他选择性培养基上，从菌落形态上一般能看出来，最好的办法是接种到显色培养基上，就更明显了。

单凭形态观察是很主观的方法，不够严谨，显色培养基也是观察形态，另外就是不是每种菌都具有相应的显色培养基。
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12楼2010-12-19 19:05:38
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ycj0746

银虫 (小有名气)
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Originally posted by 鬼豆虫 at 2010-12-12 21:21:53:
镜检呀。 一般都镜检。 镜检就很准了。

一点也不准，真的，很主观的说，很多菌的形态差别细微用镜检是根本检测不出来的，但是在序列及生物学功能上却差别很大的。
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13楼2010-12-19 19:07:30
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ycj0746

银虫 (小有名气)
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Originally posted by xuanxuankaoyan at 2010-12-19 19:41:07:

可以适当的稀释菌液，ＰＣＲ，测序。

我的理解应该是不稀释，直接取菌液原样PCR，然后测序，得到序列结果才能算纯。这里PCR扩增的应该是16S的全长吧，而不失其中部分片段的序列结果。PCR然后测序才能得到纯或不纯的结果，如果不纯，那么还得反复纯化再次PCR，然后再送检，挺耗费时间的。
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15楼2010-12-19 19:51:49
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ycj0746

银虫 (小有名气)
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Originally posted by 0050910002 at 2010-12-19 19:53:21:
尽量挑单菌落，跑的PCR预配液尽量保证不被污染

我当然也是这么做，但是很多情况下，测序的结果常常不尽如人意。
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17楼2010-12-19 19:58:36
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ycj0746

银虫 (小有名气)
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Originally posted by xuanxuankaoyan at 2010-12-19 20:11:46:

错，PCR的灵敏度很高，模板稀释了，可以提高特异性，相对得到纯的结果

呵呵，我不明白你说的错是指什么错了？我的意思是菌液（原样）如果是纯的，那么就没有必要稀释，如果稀释后再PCR，即使PCR能测出序来，也只能证明你稀释后的菌液是纯的，但是对于未稀释的菌液（原样）则不一定纯，对吧？PCR的灵敏性当然很好，对于这点我不怀疑。
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19楼2010-12-19 20:18:50
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