应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】AnnexinV/PI双染检测凋亡细胞，结果“诡异”，求帮助！
51/1返回列表
查看: 6441  |  回复: 36
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

richenim

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】AnnexinV/PI双染检测凋亡细胞，结果“诡异”，求帮助！

最近在做AnnexinV/PI双染检测凋亡细胞，用的是凯基生物的AnnexinV/PI试剂盒，细胞给药24小时后，有70%都变圆收缩，还有20-30%都漂了起来，但是用流式检测凋亡的结果却只有百分之几而已，请高手帮我解答下这是为什么啊？
PS:本人之前还做了hochest33342和DNA Ladder，结果都显示我的药是有促凋亡作用的。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

细胞实验操作 流式

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-12-10 09:31:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by richenim at 2010-12-11 22:38:49:

1、做不出阳性结果？怎样才是阳性结果啊？是前面要有亚二倍体峰吗？
2、悬浮在培养基中的细胞要收集不？离心得到细胞后腰用PBS洗涤不？
3、缓慢加入1.5ml无水乙醇，边加边摇匀，加完后还需要用枪吹打混匀不？ ...

哈，我以为你是做周期……不是做凋亡

sub G1法我们从来不用，如果是S phase dependent的凋亡或者G2/M时期的，那可能根本就观察不到sub G1，这个方法假阴性极高。而且不懂的人把碎片峰当sub G1看了，贻笑大方……
赞一下(1人) 回复此楼
19楼2010-12-11 23:26:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 37 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
richenim(金币+5): 2010-12-10 11:39:23
dhd997(金币+2):good 2010-12-10 14:36:38
我们实验室用凯基的双染试剂盒就是没做出来，后来换了Trevigen的（和R&D搞贴牌的）就做出来了~

另外要考虑制备的问题，是不是制备的时候损失了很多细胞
还有就是有没有注意用无EDTA的胰酶消化细胞
如果用了EDTA的胰酶，有没有PBS洗
还有检测的时候有没有注意时间，以及避光等
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-12-10 10:35:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

richenim

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-10 10:35:38:
我们实验室用凯基的双染试剂盒就是没做出来，后来换了Trevigen的（和R&D搞贴牌的）就做出来了~

另外要考虑制备的问题，是不是制备的时候损失了很多细胞
还有就是有没有注意用无EDTA的胰酶消化细胞
如果用 ...

我送检的地方都是用的凯基生物的哦，别人都可以做出来哦！
给药时间到了后，我是收集上清，再用胰酶-EDTA消化细胞，离心1000rpm，5min，再用PBS洗两次，再将细胞保存在PBS里面，拿去检测。（我从学校到送检的地方有两个小时，两个小时中细胞就保存在PBS里面，然后放在冰盒里，不知道这个时间的耽误有没有问题哦！）
赞一下 回复此楼
3楼2010-12-10 11:06:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
上图吧……结合图片给你做分析。而且我做的方法跟你的有点点不一样
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-12-10 11:09:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 37 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭