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lwfangel铜虫 (初入文坛)
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[交流]
【求助/交流】大肠杆菌菌液，如何再扩增？已有5人参与
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用大肠杆菌做克隆，挑好白色单菌落之后，放到1mlAmp抗性的LB培养基中，摇菌，浑浊后做菌液PCR。对于有克隆产物的菌液，我怎样才能得到更多的菌液呢？ 我想将有克隆产物的菌液吸取10ul，加到1mlAmp抗性的LB培养基中，摇菌，这样做是否合理？我这样做了之后，再做PCR去没有产物条带，不知道是什么原因？ 还有我做的菌液PCR在第二次，点样跑胶时，去没有条带了，又是怎么回事？菌液PCR产物很不稳定吗？ |
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lwd19831217
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+2):辛苦 早睡 2010-12-09 00:40:59
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我们也几乎是和他们一样的。但我们的样非常多，就换了种做法：直接用的96孔深孔板摇菌，2ML容积的深孔板装500至800培养基，盖那种透气的parafilm膜（固定好容易翘起来），在摇床上固定住摇，培养好后直接用排枪转移80微升到预加同样体积30%甘油的96孔板里进冰箱保存，剩下的转至96孔板直接离心（据说有能直接离深孔板的转子可惜现有的只能离96孔板），沉淀用水重悬，略补些吐温混合后直接加到扩增体系中，就去扩了（沉淀亦可加裂解液直接跑电泳检测质粒的）。一批就是96个，仪器允许的条件下一天可以检测许多样。 |
11楼2010-12-09 00:39:24
lwd19831217
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12楼2010-12-09 00:50:20