| 查看: 2780 | 回复: 15 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【求助/交流】连接几次，仍然不见菌落出现
|
|||
|
最近做载体构建，很不顺。 主要是把酶切后的片段（约2000bp)连到载体上，转化后总是没有菌落出现。 前些天相同的位置连了另一条片段出现了很多克隆，测序也是对的，现在真是很迷茫（感态应该没问题，因为用的同一批；T4Ligase应该也没问题） [ Last edited by zhangxn2010 on 2010-12-4 at 09:37 ] PS:本帖中问题已在2011年解决，当时没有放上具体原因，现做说明，以对有相关问题的虫友有启发。 用相当长的时间排除，最后在电泳液上找出了问题，第一个载体构建完之前一直选用TAE做缓冲液，后来一个刚来的海归博士建议用TBE（理由当然是条带清楚之类的），噩梦就开始了，原来是TBE和胶回收试剂盒有冲突，造成回收产物不能进行连接。 希望虫子们多注意小细节，我因为这点失误耽误近两月，领导眼都快绿了（当然还有其他并行工作，否则直接被炒掉了）。 [ Last edited by zhangxn2010 on 2012-12-11 at 15:10 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有225人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- DSC一次升温曲线 出现熔融双峰 是什么原因 二次升温会不会只出现一个峰
已经有4人回复
- 有机问高分子的问题！~！蛋白连接，金币可追加，求大神
已经有13人回复
- 哪位大侠做过高分子的连接反应？谢谢了。
已经有5人回复
- 求几个中国搞纳米材料的牛的重点实验室@一些关于纳米氧化锌的文章（名字即可）！
已经有28人回复
- 连接转化出现很多微小的菌落
已经有14人回复
- 磷酸铁锂专利无效案中方胜出几成定局
已经有8人回复
- 几篇有关贵金属nps、core-shell、异质结合成、制备、性质、应用的Chemical reviews
已经有403人回复
- 单菌落的获得要经过几次培养？
已经有16人回复
- 帮忙分析一下这几个响应面的图
已经有16人回复
- 求助，MS培养中出现红色菌落，这是什么菌？
已经有11人回复
- 虚心请教关于平—粘末端的连接问题
已经有18人回复
- 为什么我在培养基上点菌的时候旁边总是会出现多余的菌落！！！！
已经有20人回复
- 连接转化后菌落PCR验证出现非特异性扩增
已经有5人回复
- 克隆基因和载体连接后转化至大肠杆菌，为什么每次涂板都是空平板没有菌落？
已经有17人回复
- 【求助/交流】连接产物转化后菌落PCR正确，提取的质粒却比空质粒还小？
已经有4人回复
3楼2010-12-04 10:35:50
自己顶一下，希望大家来讨论。2楼2010-12-04 09:38:04
4楼2010-12-06 11:32:35
5楼2010-12-06 11:36:49
20