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labladycheng

铁虫 (小有名气)

[交流] 【请教】动态光散射（Dynamic light scattering）

请教如何分析：动态光散射（Dynamic light scattering）测金属纳米粒子和蛋白作用前后粒径的变化。

比如：蛋白本身在室温下粒径分布图呈现两个重叠的双峰；而和金属纳米粒子作用后的蛋白在室温下则呈现为两个独立的双峰，且峰值都变大，即粒径增大。这说明什么？说明纳米粒子和蛋白连接而导致粒径变大吗？

此外，确保蛋白不变性的条件下，同样加热（60度）蛋白空白样和纳米修饰的蛋白样，发现经纳米修饰的蛋白粒径比蛋白空白样的粒径小。这有说明什么问题？是加热条件下，纳米粒子和蛋白作用力增强，导致粒径变小吗？

文献中只是罗列这些数据，我不知该如何理解。恳请高手多多指教！谢谢！
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1楼2010-12-01 16:51:07
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ckm840529

铁杆木虫 (著名写手)
labladycheng(金币+1): 2010-12-02 08:16:04
用DLS去表征这种结合是很危险的，首先一点是，您说的粒径变大变小的结果，一共重复了几次，重复性怎么样？
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2楼2010-12-02 00:07:57
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labladycheng

铁虫 (小有名气)
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Originally posted by ckm840529 at 2010-12-02 00:07:57:
用DLS去表征这种结合是很危险的，首先一点是，您说的粒径变大变小的结果，一共重复了几次，重复性怎么样？

“危险”？
是因为重复性不好吗？这是一篇文献中提到的表征手段，我想将这种方法用于自己的实验。文献中并未提到重复几次，不过得到的粒径分析图很有规律。
如见如下："Anti-glycation activity of gold nanoparticles, Nanomedicine: Nanotechnology, Biology, and Medicine, 2009, 5, 21-29." IF=5.982.文献的影响因子不低，我觉得有参考价值。
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3楼2010-12-02 08:20:03
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huangtiantian

银虫 (初入文坛)
labladycheng(金币+1): 2010-12-02 11:31:02
我也测过金属钠米粒子和蛋白作用后的DLS，用的马尔文的仪器测得，但效果都不太好，请问你做之前超声了吗？
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4楼2010-12-02 11:20:13
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labladycheng

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by huangtiantian at 2010-12-02 11:20:13:
我也测过金属钠米粒子和蛋白作用后的DLS，用的马尔文的仪器测得，但效果都不太好，请问你做之前超声了吗？

因为我还没开始做此实验，只是看到这篇文献而已。
文献中也是用马尔文仪器测得，每分钟测一次，每个样品连续测十次。看文章中贴出的图片，感觉效果很好。

以前南开高分子所的一位安老师说过：动态光散射重在分析数据。我想文献中得到的漂亮曲线图应该是作者经过数据取舍后得到的吧。你觉得呢？

此外，如果超声不影响你的样品，做超声可以让粒子变得更小，且分布更均匀，看起来是好办法。但前提是，如果是蛋白之类的，超声波不会导致其结构变化吗？
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5楼2010-12-02 11:30:03
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huangtiantian

银虫 (初入文坛)
你是南开的吗？我是天大的，呵呵，因为蛋白会诱导纳米颗粒的聚集吧，我以前做的时候不超声，这样扫几遍下来会发现越来越大，不得已只有超声一下，但给出的报告还是不好，都是PDI指数太高，存在聚集现象，我觉得这种检测方法并不是很可取~~
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6楼2010-12-02 11:40:21
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huangtiantian

银虫 (初入文坛)
数据应该没有取舍吧，马尔文会自动给图，给数据的话会不会太麻烦了，如果说取舍，可能就是他从重复的几次试验中选出来他自己希望要的数据吧
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7楼2010-12-02 11:46:17
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labladycheng

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by huangtiantian at 2010-12-02 11:40:21:
你是南开的吗？我是天大的，呵呵，因为蛋白会诱导纳米颗粒的聚集吧，我以前做的时候不超声，这样扫几遍下来会发现越来越大，不得已只有超声一下，但给出的报告还是不好，都是PDI指数太高，存在聚集现象，我觉得这 ...

对滴，我是南开的，已经工作快一年了，呵呵...真巧，我们是邻居，很亲切

我明白你的意思，的确，纳米粒子很易聚集。不过，不知你的实验具体合成步骤如何？

是先合成纳米粒子，然后和蛋白作用的吗？这篇文献中的合成类似一锅法。它没有对纳米

金进行表征，直接测一锅法合成出来的纳米金修饰的蛋白粒径。在合成中，它将HAuCl4和

NaBH4先后加入到蛋白缓冲溶液体系中，从而得到纳米金修饰的蛋白。这种做法也是参照

一篇文献：Nanomedicine, 3, 2007, 208-214.

有个词“seeding”可能更容易理解这种合成过程。不知你的合成先后顺序如何？如果是先合成纳米金，然后在使其与蛋白作用，在测试过程中可能更容易导致纳米金的聚合。
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8楼2010-12-02 12:30:37
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labladycheng

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by huangtiantian at 2010-12-02 11:46:17:
数据应该没有取舍吧，马尔文会自动给图，给数据的话会不会太麻烦了，如果说取舍，可能就是他从重复的几次试验中选出来他自己希望要的数据吧

不好意思哈，我没测过，我同事做过，她说测试老师给她的是一大推数据。

所以就请教了安老师，她说，动态光散射重在取舍数据，不知她的意思是不是你说的那样。

我一会问问我同事她测试的具体过程。再讨论啊
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9楼2010-12-02 12:32:53
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labladycheng

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by huangtiantian at 2010-12-02 11:46:17:
数据应该没有取舍吧，马尔文会自动给图，给数据的话会不会太麻烦了，如果说取舍，可能就是他从重复的几次试验中选出来他自己希望要的数据吧

我问了同事，马尔文仪器会自动给图，同时还有一组数据文献。

如果你觉得其中某几个数据偏差较大，根据自己对体系的理解可以不采用，重新作图。

这就是安老师认为的数据取舍。
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10楼2010-12-02 14:11:56
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labladycheng

铁虫 (小有名气)
我看了好几篇文献，都有通过DLS表征纳米粒－蛋白作用后的直径的，比如：
JACS, 2009, 131, 2151-2158.

有一篇专门讲纳米粒子－蛋白作用后对其结构和功能检测的文献很好，分享如下：
“Structure and function of nanoparticle-protein conjugates, Biomed. Mater., 3(2008)034001 (17pp)”. 不过这篇文章好像没提到DLS
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11楼2010-12-02 22:59:08
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ckm840529

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by labladycheng at 2010-12-02 09:59:08:
我看了好几篇文献，都有通过DLS表征纳米粒－蛋白作用后的直径的，比如：
JACS, 2009, 131, 2151-2158.

有一篇专门讲纳米粒子－蛋白作用后对其结构和功能检测的文献很好，分享如下：
“Structure and functio ...

纳米粒子-蛋白质作用的研究很多，表征方法也很多。但是直接用DLS表征的并不多，即使是用DLS表征，粒径也在100nm左右，如果像JACS文中使用10nm的金，结合蛋白质，再用DLS进行表征是不太可信的。不知道lz体系中的纳米粒子和蛋白质结合前后的粒径在什么范围之内？
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12楼2010-12-05 10:42:13
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labladycheng

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by ckm840529 at 2010-12-05 10:42:13:

纳米粒子-蛋白质作用的研究很多，表征方法也很多。但是直接用DLS表征的并不多，即使是用DLS表征，粒径也在100nm左右，如果像JACS文中使用10nm的金，结合蛋白质，再用DLS进行表征是不太可信的。不知道lz体系中的 ...

作用前是30－1000nm，作用后是60－110nm。

我可以这样理解你的意思吗：
1.DLS对于十几nm的粒径检测不太科学；
2.DLS对纳米粒子－蛋白作用的表征只是其中的一个辅助手段。
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13楼2010-12-05 15:39:46
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labladycheng

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by ckm840529 at 2010-12-05 10:42:13:

纳米粒子-蛋白质作用的研究很多，表征方法也很多。但是直接用DLS表征的并不多，即使是用DLS表征，粒径也在100nm左右，如果像JACS文中使用10nm的金，结合蛋白质，再用DLS进行表征是不太可信的。不知道lz体系中的 ...

有篇Review不知你有没看过，文献300页显示DLS检测低于10nm的粒径分部，谱图非常规整。 Ref: Chem.Rev. 2004, 104, 293-346.
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14楼2010-12-05 16:44:38
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ckm840529

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by labladycheng at 2010-12-05 02:39:46:


作用前是30－1000nm，作用后是60－110nm。

我可以这样理解你的意思吗：
1.DLS对于十几nm的粒径检测不太科学；
2.DLS对纳米粒子－蛋白作用的表征只是其中的一个辅助手段。

你理解完全正确，我就是这个意思。
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15楼2010-12-06 00:00:31
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ckm840529

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by labladycheng at 2010-12-05 03:44:38:


有篇Review不知你有没看过，文献300页显示DLS检测低于10nm的粒径分部，谱图非常规整。 Ref: Chem.Rev. 2004, 104, 293-346.

这篇文献我没看过，谢谢你提供。300页这个给出的DLS谱图“很好”，但我要说，即使有聚集体，或者假象的聚集体，其实是在这个13nm之外的，他没有显示。另外，他没有给出Y轴的权重，是Int，Vol. 还是Num，不得而知。虽然Malvern仪器能够给出Num的权重，并且很有时候“真的”是单分散，但是原始数据经过多次的理论转换已经不可靠了。即使最后结果和TEM吻合，也只是巧合，不可当真。
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16楼2010-12-06 00:28:05
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ckm840529

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by labladycheng at 2010-12-05 03:44:38:


有篇Review不知你有没看过，文献300页显示DLS检测低于10nm的粒径分部，谱图非常规整。 Ref: Chem.Rev. 2004, 104, 293-346.

我查了一下原始文献，声明一点：300页的粒径和分布是基于TEM图统计得到的结果。因此没有给出Y轴的权重，换句话说，应该是num的权重，但通过TEM获取，可靠性极好。
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17楼2010-12-06 00:53:37
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labladycheng

铁虫 (小有名气)
讲的真好！我明白了，看来我只知其一不知其二！多谢高手指点！！
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18楼2010-12-06 08:43:54
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huangtiantian

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by huangtiantian at 2010-12-02 11:46:17:
数据应该没有取舍吧，马尔文会自动给图，给数据的话会不会太麻烦了，如果说取舍，可能就是他从重复的几次试验中选出来他自己希望要的数据吧

我是先合成纳米粒子在连得蛋白，我是做的磁性四氧化三铁纳米颗粒表面连蛋白，是希望保留蛋白的活性进行应用！
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19楼2010-12-08 09:31:32
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tlltll

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by ckm840529 at 2010-12-02 00:07:57:
用DLS去表征这种结合是很危险的，首先一点是，您说的粒径变大变小的结果，一共重复了几次，重复性怎么样？

为什么很危险呢？
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20楼2010-12-08 11:28:24
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Kathy2011

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
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1楼: Originally posted by labladycheng at 2010-12-01 16:51:07:
请教如何分析：动态光散射（Dynamic light scattering）测金属纳米粒子和蛋白作用前后粒径的变化。

比如：蛋白本身在室温下粒径分布图呈现两个重叠的双峰；而和金属纳米粒子作用后的蛋白在室温下则呈现为两个独 ...

粒径随温度的升高而变大，说明粒径本身热力学不稳定。
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21楼2011-12-06 18:40:29
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jiangcj09

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by labladycheng at 2010-12-02 08:20:03
“危险”？
是因为重复性不好吗？这是一篇文献中提到的表征手段，我想将这种方法用于自己的实验。文献中并未提到重复几次，不过得到的粒径分析图很有规律。
如见如下："Anti-glycation activity of gold ...

关于DLS谱图上多个峰的解释，我有疑问：
如果有多个峰，那么PDI应该很高，这时，是不是DLS的数据就不可用了？
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22楼2013-04-06 04:20:47
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