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350784478

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】我的蛋白哪去了?焦虑啊! 已有9人参与

各位大侠,能否帮我分析一下,我昨天刚刚提取的蛋白,当时就加buffer煮沸5min,然后跑电泳,考马斯亮蓝染色,效果很好,蛋白条带很清晰,今天想转膜,所以每个样品都拿出来煮了4min,跑两个泳道,一个做考马斯亮蓝染色,另一个转膜(其余操作和昨天一样)。但是结果不如人意,和前面的一样,做考马斯亮蓝染色后,除了marker以外,没有其他条带,转膜的结果也是这样,不知道我的蛋白哪去了?大家能否帮我分析一下原因。非常感谢。
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朝为田舍郎,暮登天子堂。将相本无种,男儿当自强。
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kkunny

铜虫 (著名写手)

不是分解了吧
好好学习,天天向上
2楼2010-12-01 14:47:44
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xuqingchun33

银虫 (小有名气)

加PMSF了没
在这个纷绕的世俗世界里,能够学会用一颗平常的心去对待周围的一切,也是一种境界。
3楼2010-12-01 14:53:57
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

buffer?
4楼2010-12-01 16:23:41
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350784478

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by jurkat.1640 at 2010-12-01 16:23:41:
buffer?

buffer没有问题,因为我是先煮了,再冻起来的,当时跑的效果很不错,只是隔天再跑,完全不能看。
朝为田舍郎,暮登天子堂。将相本无种,男儿当自强。
5楼2010-12-02 19:02:07
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350784478

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by xuqingchun33 at 2010-12-01 14:53:57:
加PMSF了没

加了,在加裂解液的时候,就加了PMSF。
朝为田舍郎,暮登天子堂。将相本无种,男儿当自强。
6楼2010-12-02 19:02:47
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qutingting49

新虫 (初入文坛)

是不是被污染了?
7楼2010-12-02 19:26:43
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xhjggl

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-12-05 21:12:20
需要加入蛋白酶抑制剂复合物,上海生工就有!

本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2653347

N3-1A  Protease Inhibitor Cocktail Series For Protein Extract-----蛋白酶抑制剂复合物
BS381        Protease Inhibitor Cocktall (For Bacterial Cell, with EDTA)        100X        1ml        BBI
BS380        Protease Inhibitor Cocktall (For Bacterial Cell, EDTA Free)        100X        1ml        BBI
BS382        Protease Inhibitor Cocktall (For Fungal/Yeast Cell)        100X        1ml        BBI
BS384        Protease Inhibitor Cocktall  (For Plant Cell)        100X        1ml        BBI
BS386        Protease Inhibitor Cocktall (For Mammalian Cell)        100X        1ml        BBI
BS387        Protease Inhibitor Cocktall (For Mammalian Cell)        100X        1ml        BBI
Component        BS380         BS381        BS382        BS384        BS386        BS387
PMSF        100 mM        100 mM        100 mM        200 mM        100 mM        104mM
EDTA                100 mM                               
Bestatin        2 mM        2 mM                2mM        1mM       
Pepstatin A        0.3 mM        0.3 mM        2.2 mM        1mM        1.5mM       
E-64        0.3 mM        0.3 mM        1.4 mM        1mM        1.4mM        0.1mM
1,10-Phenanthroline                        500 mM        500mM               
Aprotinin                                0.08mM        0.08mM        0.08mM
Leupeptin                                1mM        1mM        0.1mM
Price        ¥500        ¥540        ¥880        ¥920        ¥1050        ¥160
Description:
Crude cell extracts contain a number of endogenous enzymes, such as proteases and phosphatases, which are capable of degrading the proteins present in the extract. The best way to improve the yield of intact proteins is to add inhibitors of  these enzymes known to be present in the source material. This series of protease inhibitor cocktail contain a mixture of protease inhibitors with a broad specificity for the inhibition of serine, cysteine, aspartic, metalloproteases, and  aminopeptidases etc. which have been optimized and tested for bacterial, fungal /yeast, plant and mammalian cell proteinextraction.
Applications:One vial of cocktail is recommend for inhibition of 20g tissues or 109cells in general (BS381 for 4g bacteria).
Features:Economical, Ready to use.It is suitable for long term storage.
Storage Condition: Cocktail at –20°C.The cocktail is supplied as a clear solution in dimethyl sulfoxide (DMSO), and stable for a year.;Avoid repeated thawing and freezing.
8楼2010-12-05 21:05:26
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lsbrc

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
加了SDS,再冻起来了,一般不会这么容易就降解了。
是不是,你没有完全解冻,SDS一定要完全解冻才行的?
9楼2010-12-06 09:20:16
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huanglimei

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by xhjggl at 2010-12-05 21:05:26:
需要加入蛋白酶抑制剂复合物,上海生工就有!

本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2653347

N3-1A  Protease Inhibitor Cocktail Series For Protein Extract-----蛋白 ...

能否附上   Protease Inhibitor Cocktall (For Mammalian Cell) 的价格啊,谢谢
10楼2010-12-06 18:15:42
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