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honglanbai

木虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 5803.2
帖子: 453
在线: 66.8小时
虫号: 478698

[交流] 【求助/交流】细胞被支原体污染有救吗

我扩PCR后，发现我的细胞被支原体污染了，谁知道有什么方法既能杀死支原体又能保住我的细胞吗。万分感谢。

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1楼 2010-12-01 12:31:42

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feng__

金虫 (著名写手)

应助: 1 (幼儿园)
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虫号: 1061078

★ ★ ★
dhd997(金币+3):good 2010-12-01 18:41:36
honglanbai(金币+3): 2011-01-06 13:15:59

下面是我从小木虫里一个热心MM那里得来的一些经验，对付细菌污染的，要不你也试试

所以处理细菌污染的重要原则就是：无限地稀释细菌的浓度，无限地减少细菌的数量！
1）.将污染的培养液倒掉，转烧瓶口，加入10mlPBS，适当晃动清洗培养瓶，然后倒掉。转烧瓶口。
2）.继续加入10mlPBS，同样方法晃动，清洗培养瓶，然后倒掉。
3）.继续加入5mlPBS，同样方法洗瓶，主要是培养面，然后倒掉。
4）.重复步骤3再洗。
5）.重复步骤3再洗。
6）.加入3-5ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。
7）.加入3ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。
8）.再加入5mlPBS洗瓶，然后吸出。
9）.加入10ml培养液，加入2ml双抗，放置培养箱培养，5小时之后，倒掉培养基，加入PBS洗瓶两次，然后加入胰酶消化，吹打后置于离心机800-1000r/min离心，然后洗一次。置于新的培养瓶里培养，培养体系加入2ml双抗。
10）.24h之后，视情况换液，若仍然污染严重，培养基浑浊，重复以上步骤，若看不到污染物，则继续步骤1)、3）、4）、6）、8），然后加入培养液培养，培养体系加入2ml双抗.
11).24h之后，若仍污染严重，可再重复一次，若还污染只能弃之（不过一般没有出现这种情况），若镜下不见污染物，则换液PBS洗瓶，正常培养。

以上方法主要是针对贴壁生长的细胞，在操作的过程中，一定要小心操作动作，轻柔缓慢，切忌大动作鲁莽。防止细胞脱落。以上方法操作得当，基本上都能救活你的细胞（我还没有听到没救活的反馈）。当然如果你的细胞仍有富余或者冻存的，我还是建议你把污染的扔掉，再复苏方便省事。这个拯救细胞还是主要针对你就只剩这一瓶细胞无路可退的时候。欢迎大家讨论！