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honglanbai

木虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】细胞被支原体污染 有救吗

我扩PCR后,发现我的细胞被支原体污染了,谁知道有什么方法既能杀死支原体又能保住我的细胞吗。万分感谢。
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feng__

金虫 (著名写手)


★ ★ ★
dhd997(金币+3):good 2010-12-01 18:41:36
honglanbai(金币+3): 2011-01-06 13:15:59
下面是我从小木虫里一个热心MM那里得来的一些经验,对付细菌污染的,要不你也试试



所以处理细菌污染的重要原则就是:无限地稀释细菌的浓度,无限地减少细菌的数量!
1).将污染的培养液倒掉,转烧瓶口,加入10mlPBS,适当晃动清洗培养瓶,然后倒掉。转烧瓶口。
2).继续加入10mlPBS,同样方法晃动,清洗培养瓶,然后倒掉。
3).继续加入5mlPBS,同样方法洗瓶,主要是培养面,然后倒掉。
4).重复步骤3再洗。
5).重复步骤3再洗。
6).加入3-5ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。
7).加入3ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。
8).再加入5mlPBS洗瓶,然后吸出。
9).加入10ml培养液,加入2ml双抗,放置培养箱培养,5小时之后,倒掉培养基,加入PBS洗瓶两次,然后加入胰酶消化,吹打后置于离心机800-1000r/min离心,然后洗一次。置于新的培养瓶里培养,培养体系加入2ml双抗。
10).24h之后,视情况换液,若仍然污染严重,培养基浑浊,重复以上步骤,若看不到污染物,则继续步骤1)、3)、4)、6)、8),然后加入培养液培养,培养体系加入2ml双抗.
11).24h之后,若仍污染严重,可再重复一次,若还污染只能弃之(不过一般没有出现这种情况),若镜下不见污染物,则换液PBS洗瓶,正常培养。

以上方法主要是针对贴壁生长的细胞,在操作的过程中,一定要小心操作动作,轻柔缓慢,切忌大动作鲁莽。防止细胞脱落。以上方法操作得当,基本上都能救活你的细胞(我还没有听到没救活的反馈)。当然如果你的细胞仍有富余或者冻存的,我还是建议你把污染的扔掉,再复苏方便省事。这个拯救细胞还是主要针对你就只剩这一瓶细胞无路可退的时候。欢迎大家讨论!
4楼2010-12-01 13:24:11
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feng__

金虫 (著名写手)



honglanbai(金币+1):谢谢参与
木有冻存的细胞了么,最好还是重新复苏吧
3楼2010-12-01 13:22:33
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)



honglanbai(金币+1):谢谢参与
没救了,放手吧
5楼2010-12-01 16:25:04
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mourning

木虫 (正式写手)



honglanbai(金币+1):谢谢参与
普拉霉素,用治疗浓度,养一段时看看再检测
7楼2010-12-01 18:46:26
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