| 查看: 3793 | 回复: 10 | ||||
[交流]
【求助/交流】请教肺泡巨噬细胞的提取与培养，中性红法吞噬功能检测
|
||||
|
我提的AM细胞经常生长状态不好,方法是将预冷的PBS进行肺灌洗，灌洗液1000r/min离心10min,弃上清，留下层细胞沉淀，再用PBS重新悬浮细胞，洗涤3次。用含10%小牛血清的RPM1640细胞培养液重悬细胞，制成单细胞悬液，分于培养瓶中，培养液3.0ml，在CO2细胞培养箱（37℃，5%CO2）中孵育2h使之贴壁生长，弃上清，用PBS洗板2次去除未贴壁细胞，重新加入含10%胎牛血清的RPM1640培养基，继续放入培养箱内培养，2～3天更换培养液。 问题是：2h后洗瓶时总是发现细胞贴壁状态不好，悬浮细胞比较多，一洗就洗出来了（我洗时只是用PBS晃了晃，没有吹），有一次想试试看让它多孵育点时间再洗会不会贴的更好，结果连贴壁细胞也悬起来了。后来就孵育2h后必洗，但是有时2h后贴的还可以，洗完换了液后孵育十几个小时，又悬浮了。我听说AM贴壁状态特别好，很难消下来。我提取的细胞贴壁不好是不是说明生长状态就不好呢。我提了很多次了，分析了原因，可是总是这样。请教有没有注意事项没考虑到，还是方法有问题？ 中性红吞噬试验也有问题。我的配制方法是：1、用含10%FBS的RPM1640培养液配制0.1%的中性红，充分搅拌。2、37摄氏度水浴过夜，过滤（整个过程中避光）。过滤后颜色很浅，就像培养液颜色一样。 实验步骤：2.0×10^6个/ml的细胞悬液200μl接种于96孔板，孵育24h后换200μl纳米颗粒染毒悬液，继续孵育24h,弃旧液，PBS洗板两次以尽量洗去残留的颗粒。加入200μl中性红（中性红是现用现配）孵育3h，PBS洗板3次加入裂解液（冰乙酸：无水乙醇=1:1），避光静置12h，550nm波长测吸光度值。 可是结果不理想，吸光度值都差不多，而且特别小，才0.08左右，不知哪里出了问题。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 肺泡巨噬 |
» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有87人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有67人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 平板计数培养----材料无菌匀质问题
已经有7人回复
- 冷藏猕猴桃乙烯释放量检测
已经有3人回复
- 室内空气检测设备总共需要多少钱
已经有5人回复
- 请问中科院的博士出国联合培养信息在哪查询呀
已经有5人回复
- 活性炭公司VS检测公司
已经有20人回复
- 请教各位有没有可以临时增加材料表面透明性的方法？
已经有8人回复
- mol%的请教。请大侠帮我看看。
已经有9人回复
- 请教嵌入式学习规划？
已经有6人回复
- 请教一句话的翻译，谢谢
已经有1人回复
- 除了白色念珠菌和黑曲霉，还有什么真菌比较容易培养？
已经有9人回复
- 请教如何向访问学者外师提出给点补助费用
已经有7人回复
- 细菌基因组DNA提取 交流
已经有18人回复
- 为什么要从钢板板宽 1/4 处取母材做检测
已经有11人回复
- 请教甲苯的除水问题
已经有23人回复
- 请教一下目前最新的太阳能电池
已经有11人回复
- 请教异质外延生长晶体薄膜的晶向与衬底材料晶向的关系~【回答有帮助的送红花】
已经有39人回复
- 红外光谱检测方法，请教大家一下！！
已经有4人回复
- 请教一个关于JSPS机票订购的问题
已经有3人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
散金币
+1/931
-
散金祈福
+3/783
-
面上第三年申请，改了一遍又一遍，希望能中啊！散金祈福！！！
+5/625
-
基金申请小调查！预祝申请必定中中中！！祈福！！！
+5/255
-
南方医科大学|生物材料与医学工程团队诚聘科研助理
+2/248
-
诚征另一半
+1/170
-
上海交通大学张航课题组招聘博士后（电化学储能）
+1/89
-
那年春暖花开，今朝如梦初醒 —— 北漂十五载，相亲十年，归乡孑然一身
+1/68
-
强耀生物金秋开学季活动，2026年8月18日-10月31日，肽库筛选低至2W5
+3/37
-
瑞典-博后-固态电池-粘结剂-锂离子电池方向
+1/35
-
坐标南京
+1/31
-
北理工集成电路杰青团队 | 诚招科助理
+1/20
-
***大叔找对象（沪深等地）
+1/20
-
流放岭南浮肿了求救
+1/20
-
北京理工大学-集成电路与电子学院杰青团队-招博士后
+1/19
-
pcold 原核表达载体
+1/8
-
南方医科大学深圳医院陈烨/余涛教授课题组联合培养博士后招聘
+1/6
-
出全新蔡司 Plan?APOCHROMAT 20×/0.8 平场复消色差物镜
+1/2
-
【产品测评分享】体外转录产量不理想、dsRNA 副产物高？T7 RNA 聚合酶实测体验
+1/1
-
找女友
+1/1
2楼2010-12-01 18:43:23
3楼2010-12-03 14:27:43
4楼2010-12-08 20:51:53
5楼2013-02-26 19:58:12
6楼2013-04-10 21:21:49
7楼2014-01-08 17:59:14
8楼2017-03-21 20:45:21
9楼2017-09-17 15:54:25
简单回复
wdxmu10楼
2017-09-17 16:50
回复
huchuanlu5(金币+1): 谢谢参与
一 发自小木虫IOS客户端
wdxmu11楼
2017-09-17 16:50
回复
