| 查看: 3317 | 回复: 10 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[交流]
【求助/交流】请教肺泡巨噬细胞的提取与培养，中性红法吞噬功能检测
|
||||
|
我提的AM细胞经常生长状态不好,方法是将预冷的PBS进行肺灌洗，灌洗液1000r/min离心10min,弃上清，留下层细胞沉淀，再用PBS重新悬浮细胞，洗涤3次。用含10%小牛血清的RPM1640细胞培养液重悬细胞，制成单细胞悬液，分于培养瓶中，培养液3.0ml，在CO2细胞培养箱（37℃，5%CO2）中孵育2h使之贴壁生长，弃上清，用PBS洗板2次去除未贴壁细胞，重新加入含10%胎牛血清的RPM1640培养基，继续放入培养箱内培养，2～3天更换培养液。 问题是：2h后洗瓶时总是发现细胞贴壁状态不好，悬浮细胞比较多，一洗就洗出来了（我洗时只是用PBS晃了晃，没有吹），有一次想试试看让它多孵育点时间再洗会不会贴的更好，结果连贴壁细胞也悬起来了。后来就孵育2h后必洗，但是有时2h后贴的还可以，洗完换了液后孵育十几个小时，又悬浮了。我听说AM贴壁状态特别好，很难消下来。我提取的细胞贴壁不好是不是说明生长状态就不好呢。我提了很多次了，分析了原因，可是总是这样。请教有没有注意事项没考虑到，还是方法有问题？ 中性红吞噬试验也有问题。我的配制方法是：1、用含10%FBS的RPM1640培养液配制0.1%的中性红，充分搅拌。2、37摄氏度水浴过夜，过滤（整个过程中避光）。过滤后颜色很浅，就像培养液颜色一样。 实验步骤：2.0×10^6个/ml的细胞悬液200μl接种于96孔板，孵育24h后换200μl纳米颗粒染毒悬液，继续孵育24h,弃旧液，PBS洗板两次以尽量洗去残留的颗粒。加入200μl中性红（中性红是现用现配）孵育3h，PBS洗板3次加入裂解液（冰乙酸：无水乙醇=1:1），避光静置12h，550nm波长测吸光度值。 可是结果不理想，吸光度值都差不多，而且特别小，才0.08左右，不知哪里出了问题。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 肺泡巨噬 |
» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有93人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 平板计数培养----材料无菌匀质问题
已经有7人回复
- 冷藏猕猴桃乙烯释放量检测
已经有3人回复
- 室内空气检测设备总共需要多少钱
已经有5人回复
- 请问中科院的博士出国联合培养信息在哪查询呀
已经有5人回复
- 活性炭公司VS检测公司
已经有20人回复
- 请教各位有没有可以临时增加材料表面透明性的方法？
已经有8人回复
- mol%的请教。请大侠帮我看看。
已经有9人回复
- 请教嵌入式学习规划？
已经有6人回复
- 请教一句话的翻译，谢谢
已经有1人回复
- 除了白色念珠菌和黑曲霉，还有什么真菌比较容易培养？
已经有9人回复
- 请教如何向访问学者外师提出给点补助费用
已经有7人回复
- 细菌基因组DNA提取 交流
已经有18人回复
- 为什么要从钢板板宽 1/4 处取母材做检测
已经有11人回复
- 请教甲苯的除水问题
已经有23人回复
- 请教一下目前最新的太阳能电池
已经有11人回复
- 请教异质外延生长晶体薄膜的晶向与衬底材料晶向的关系~【回答有帮助的送红花】
已经有39人回复
- 红外光谱检测方法，请教大家一下！！
已经有4人回复
- 请教一个关于JSPS机票订购的问题
已经有3人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
双一流南京医科大学招计算机、AI、统计、生物信息等方向26年9月入学博士
+1/180
-
山东农业大学韩福社教授团队招聘有机合成研究助理
+1/177
-
Analytical Science Advances 征稿中
+1/173
-
广州
+1/83
-
山东第二医科大学和广州中医药大学药学硕士招生
+1/79
-
坐标北京不异地
+1/70
-
有南京的小伙伴吗，蹲个男朋友
+1/55
-
浙江师范大学申利国教授招聘博士后研究人员
+1/52
-
【招生啦招生啦】武汉理工大学朱曼副研究员招收2026年9月入学博士/硕士研究生
+1/32
-
重庆大学前沿院，黄小洋教授课题组，招收2026年非均相催化方向学术博士2名
+1/14
-
2026年中科院化学所优青 程靓团队招收有机化学、生物化学背景的博士研究生
+1/14
-
中国农业科学院棉花研究所阴祖军研究员诚招植物生物学科研助理
+1/9
-
武汉大学郭宇铮教授课题组招收博士后等研究人员【先进封装/芯片/人工智能等方向】
+1/7
-
哈尔滨工业大学招收硕士研究生（欢迎环境、市政、生物、化学、农业等专业，长期有效）
+1/6
-
山东大学集成电路学院博士招生1名
+1/4
-
论文投稿推荐
+1/4
-
北京理工大学计算材料化学课题组招聘2026年博士生/博后
+3/3
-
武汉工程大学杰青张亚文/司锐教授团队招收催化能源方向2026年博士生
+1/3
-
山东大学集成电路学院博士招生1名
+1/2
-
中科院苏州医工所单细胞分析技术中心招聘公告（细胞分选、图像识别、流式应用方向）
+1/2
8楼2017-03-21 20:45:21
2楼2010-12-01 18:43:23
5楼2013-02-26 19:58:12
6楼2013-04-10 21:21:49
简单回复
wdxmu10楼
2017-09-17 16:50
回复
huchuanlu5(金币+1): 谢谢参与
一 发自小木虫IOS客户端
wdxmu11楼
2017-09-17 16:50
回复
