| 查看: 3261 | 回复: 10 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[交流]
【求助/交流】请教肺泡巨噬细胞的提取与培养，中性红法吞噬功能检测
|
||||
|
我提的AM细胞经常生长状态不好,方法是将预冷的PBS进行肺灌洗，灌洗液1000r/min离心10min,弃上清，留下层细胞沉淀，再用PBS重新悬浮细胞，洗涤3次。用含10%小牛血清的RPM1640细胞培养液重悬细胞，制成单细胞悬液，分于培养瓶中，培养液3.0ml，在CO2细胞培养箱（37℃，5%CO2）中孵育2h使之贴壁生长，弃上清，用PBS洗板2次去除未贴壁细胞，重新加入含10%胎牛血清的RPM1640培养基，继续放入培养箱内培养，2～3天更换培养液。 问题是：2h后洗瓶时总是发现细胞贴壁状态不好，悬浮细胞比较多，一洗就洗出来了（我洗时只是用PBS晃了晃，没有吹），有一次想试试看让它多孵育点时间再洗会不会贴的更好，结果连贴壁细胞也悬起来了。后来就孵育2h后必洗，但是有时2h后贴的还可以，洗完换了液后孵育十几个小时，又悬浮了。我听说AM贴壁状态特别好，很难消下来。我提取的细胞贴壁不好是不是说明生长状态就不好呢。我提了很多次了，分析了原因，可是总是这样。请教有没有注意事项没考虑到，还是方法有问题？ 中性红吞噬试验也有问题。我的配制方法是：1、用含10%FBS的RPM1640培养液配制0.1%的中性红，充分搅拌。2、37摄氏度水浴过夜，过滤（整个过程中避光）。过滤后颜色很浅，就像培养液颜色一样。 实验步骤：2.0×10^6个/ml的细胞悬液200μl接种于96孔板，孵育24h后换200μl纳米颗粒染毒悬液，继续孵育24h,弃旧液，PBS洗板两次以尽量洗去残留的颗粒。加入200μl中性红（中性红是现用现配）孵育3h，PBS洗板3次加入裂解液（冰乙酸：无水乙醇=1:1），避光静置12h，550nm波长测吸光度值。 可是结果不理想，吸光度值都差不多，而且特别小，才0.08左右，不知哪里出了问题。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 肺泡巨噬 |
» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有84人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
平板计数培养----材料无菌匀质问题
已经有7人回复- 冷藏猕猴桃乙烯释放量检测
已经有3人回复
- 室内空气检测设备总共需要多少钱
已经有5人回复
- 请问中科院的博士出国联合培养信息在哪查询呀
已经有5人回复
- 活性炭公司VS检测公司
已经有20人回复
- 请教各位有没有可以临时增加材料表面透明性的方法？
已经有8人回复
- mol%的请教。请大侠帮我看看。
已经有9人回复
- 请教嵌入式学习规划？
已经有6人回复
- 请教一句话的翻译，谢谢
已经有1人回复
- 除了白色念珠菌和黑曲霉，还有什么真菌比较容易培养？
已经有9人回复
- 请教如何向访问学者外师提出给点补助费用
已经有7人回复
- 细菌基因组DNA提取 交流
已经有18人回复
- 为什么要从钢板板宽 1/4 处取母材做检测
已经有11人回复
- 请教甲苯的除水问题
已经有23人回复
- 请教一下目前最新的太阳能电池
已经有11人回复
- 请教异质外延生长晶体薄膜的晶向与衬底材料晶向的关系~【回答有帮助的送红花】
已经有39人回复
- 红外光谱检测方法，请教大家一下！！
已经有4人回复
- 请教一个关于JSPS机票订购的问题
已经有3人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
我的现状交流，续：老公辞职读博，我一个人白天工作晚上带孩子，真的累啊！
+1/465
-
湘潭大学化学学院陈华杰教授课题组招收有机/高分子方向的博士研究生
+1/82
-
同济大学 物理科学与工程学院 陈振跃（国家高层次青年人才） 课题组招聘博士后
+1/76
-
招贤纳博（已结束）
+1/75
-
Call for papers，征稿
+1/70
-
双一流大学湘潭大学“化工过程模拟与强化”国家地方联合工程研究中心招收各类博士生
+1/49
-
燕山大学2026级考核制博士招生——电容去离子方向（超级电容器衍生应用）
+1/36
-
宁波大学张天宇教授课题组招聘副教授/讲师
+1/29
-
南京大学能源与资源学院蔡亮课题组诚招博士后、助理研究员（AEM、PEM电解水制氢方向）
+1/15
-
中国科大-合肥国家实验室冷原子量子中继团队招聘启事
+2/10
-
南京大学能源与资源学院蔡亮课题组诚招2026年申请-考核制博士生2-3名
+1/10
-
澳大利亚南昆士兰大学（UniSQ）量子点课题组 招收CSC全奖博士生
+1/10
-
大连工业杰青、长江团队-生物质材料方向招收2026级博士生
+1/7
-
南京大学蔡亮课题组诚招2026年申请-考核制博士生2-3名（电解水制氢，XAFS谱学等）
+1/6
-
长江大学武汉校区诚招工程热物理、油气、电气等新能源博士-2025
+1/5
-
欢迎报考中山大学课题组，确保2025-2026级硕士研究生名额
+1/5
-
华南师大化学单颗粒活性组招聘1人-特聘副研究员/研究员
+1/4
-
南京航空航天大学核科学与技术方向招收博士生
+1/3
-
ETI怎么到我这这么慢
+1/3
-
中国科学技术大学 精准智能化学重点实验室 武建昌课题组招聘博士，博士后
+1/2
9楼2017-09-17 15:54:25
2楼2010-12-01 18:43:23
5楼2013-02-26 19:58:12
6楼2013-04-10 21:21:49
简单回复
wdxmu10楼
2017-09-17 16:50
回复
huchuanlu5(金币+1): 谢谢参与
一 发自小木虫IOS客户端
wdxmu11楼
2017-09-17 16:50
回复
