| 查看: 3383 | 回复: 10 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[交流]
【求助/交流】请教肺泡巨噬细胞的提取与培养，中性红法吞噬功能检测
|
||||
|
我提的AM细胞经常生长状态不好,方法是将预冷的PBS进行肺灌洗，灌洗液1000r/min离心10min,弃上清，留下层细胞沉淀，再用PBS重新悬浮细胞，洗涤3次。用含10%小牛血清的RPM1640细胞培养液重悬细胞，制成单细胞悬液，分于培养瓶中，培养液3.0ml，在CO2细胞培养箱（37℃，5%CO2）中孵育2h使之贴壁生长，弃上清，用PBS洗板2次去除未贴壁细胞，重新加入含10%胎牛血清的RPM1640培养基，继续放入培养箱内培养，2～3天更换培养液。 问题是：2h后洗瓶时总是发现细胞贴壁状态不好，悬浮细胞比较多，一洗就洗出来了（我洗时只是用PBS晃了晃，没有吹），有一次想试试看让它多孵育点时间再洗会不会贴的更好，结果连贴壁细胞也悬起来了。后来就孵育2h后必洗，但是有时2h后贴的还可以，洗完换了液后孵育十几个小时，又悬浮了。我听说AM贴壁状态特别好，很难消下来。我提取的细胞贴壁不好是不是说明生长状态就不好呢。我提了很多次了，分析了原因，可是总是这样。请教有没有注意事项没考虑到，还是方法有问题？ 中性红吞噬试验也有问题。我的配制方法是：1、用含10%FBS的RPM1640培养液配制0.1%的中性红，充分搅拌。2、37摄氏度水浴过夜，过滤（整个过程中避光）。过滤后颜色很浅，就像培养液颜色一样。 实验步骤：2.0×10^6个/ml的细胞悬液200μl接种于96孔板，孵育24h后换200μl纳米颗粒染毒悬液，继续孵育24h,弃旧液，PBS洗板两次以尽量洗去残留的颗粒。加入200μl中性红（中性红是现用现配）孵育3h，PBS洗板3次加入裂解液（冰乙酸：无水乙醇=1:1），避光静置12h，550nm波长测吸光度值。 可是结果不理想，吸光度值都差不多，而且特别小，才0.08左右，不知哪里出了问题。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 肺泡巨噬 |
» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有228人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 平板计数培养----材料无菌匀质问题
已经有7人回复
- 冷藏猕猴桃乙烯释放量检测
已经有3人回复
- 室内空气检测设备总共需要多少钱
已经有5人回复
- 请问中科院的博士出国联合培养信息在哪查询呀
已经有5人回复
- 活性炭公司VS检测公司
已经有20人回复
- 请教各位有没有可以临时增加材料表面透明性的方法？
已经有8人回复
- mol%的请教。请大侠帮我看看。
已经有9人回复
- 请教嵌入式学习规划？
已经有6人回复
- 请教一句话的翻译，谢谢
已经有1人回复
- 除了白色念珠菌和黑曲霉，还有什么真菌比较容易培养？
已经有9人回复
- 请教如何向访问学者外师提出给点补助费用
已经有7人回复
- 细菌基因组DNA提取 交流
已经有18人回复
- 为什么要从钢板板宽 1/4 处取母材做检测
已经有11人回复
- 请教甲苯的除水问题
已经有23人回复
- 请教一下目前最新的太阳能电池
已经有11人回复
- 请教异质外延生长晶体薄膜的晶向与衬底材料晶向的关系~【回答有帮助的送红花】
已经有39人回复
- 红外光谱检测方法，请教大家一下！！
已经有4人回复
- 请教一个关于JSPS机票订购的问题
已经有3人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
邀您投稿 Polymers 特刊
+1/485
-
上海87年GG诚求女友
+1/169
-
招聘启事 江南大学乳品加工与营养健康团队博士后招聘
+2/124
-
海南大学专任教师招聘：海洋工程与海洋智能装备相关方向【长期有效】
+2/116
-
华南师范大学胡勇军教授课题组招收2026年博士研究生
+1/84
-
南方医科大学发育生物学教研室夏来新教授课题组招收26级博士研究生
+1/81
-
上海交通大学变革分子学中心申涛课题组2026秋季入学推荐-考核制博士招生（有机）
+1/77
-
几个高校工作如何选择?
+1/76
-
辽宁材料实验室框架复合材料课题组招收联合培养研究生（长期有效）
+2/52
-
中山大学农业与生物技术学院周潇峰课题组诚聘微生物/植物病理学方向科研助理
+1/35
-
【教授本人】南佛罗里达大学化学系刘文奇课题组 2026 Fall 招收有机/超分子方向博士生
+1/29
-
【青岛大学】2026年生物医药博士生招生（含少数民族骨干人才）
+1/29
-
学生申博
+1/20
-
【陕西师范大学】催化化学课题组2026年招收博士后/讲师/副高
+1/17
-
浙江大学 “分子智造”课题组 诚聘 博士后及科研助理
+1/12
-
中山大学农业与生物技术学院周潇峰课题组诚聘微生物/植物病理学方向科研助理
+1/6
-
【博士后/科研助理招聘-北京理工大学-集成电路与电子学院-国家杰青团队】
+1/5
-
多伦多城市大学深度学习方向博士后
+1/4
-
中南民族大学-国家级领军人才团队超支化聚合物方向2026年博士研究生招生
+1/4
-
山东师范大学海外优青（校长团队）招聘硕士/博士/博后
+1/2
9楼2017-09-17 15:54:25
2楼2010-12-01 18:43:23
5楼2013-02-26 19:58:12
6楼2013-04-10 21:21:49
简单回复
wdxmu10楼
2017-09-17 16:50
回复
huchuanlu5(金币+1): 谢谢参与
一 发自小木虫IOS客户端
wdxmu11楼
2017-09-17 16:50
回复
