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小木木木虫

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR-DGGE 已有1人参与

最近在做PCR-DGGE
先从PCR部分讨论遇到的问题
(一)PCR
1用了相同的体系条件,实验设备,为什么之前做的很好,后面做的越来越差(不是偶发事件,是总是越做越差),会不会是酶出了问题,期间放酶的冰箱有一次解冻,冰箱里的东西全化了,会不会有影响?


















2新买回来的酶要不要分装?这样每次用就不用等酶全部溶解。
3为什么PCR产物会少很多,50微升的体系P出来损失了将近10微升
4分装的酶和混装的对DGGE有什么影响,我们做的混装的PCR检测结果比分装的亮
(二)DGGE
DGGE做了好久了,但就是做不出条带,期间去了南海所,他们那边用我们的PCR产物也做不出来,但拿到北京去,用我们提的DNA,在那边做PCR,结果DGGE跑出了很好的条带。所以我们想还是PCR出了问题
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daringhong

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+2):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-11-06 23:49:48
新买回来的酶如果量大的话,还是分装一下的好~~避免污染,也避免温度对它的影响。
你说的一直做不出来DGGE,应该还是PCR的问题。在PCR得到很好的结果的情况下,再做DGGE,一般都不会出现什么问题了
每天进步一点点~~
2楼2010-11-06 21:22:09
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