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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 本人要要做鱼类肠道微生物，但不知如何下手，请有经验的支招啊，本人无限感激
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luocongqiang

铁虫 (小有名气)

[求助] 本人要要做鱼类肠道微生物，但不知如何下手，请有经验的支招啊，本人无限感激

本人要要做鱼类肠道微生物，但不知如何下手，请有经验的支招啊，本人无限感激
首先不知道怎么从肠道中把样品提取出来，第二小弟要做dgge要提DNA不知道用什么方法体好呢，最好小弟对于PCR中用到的引物一点也不明白啊，是需要自己设计吗，还是通用的呀！

各位有什么号的方法，文献麻烦借鉴一下啊，小弟不吝感激之情
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1楼 2012-03-02 16:24:03
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jiyannangxj

至尊木虫 (著名写手)

美女搞科研

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
luocongqiang(金币+4): 2012-03-03 09:40:12
luocongqiang(金币+1): 2012-03-03 09:40:33
我做的就是微生物，你得先取鱼肠道一节，用接种环（类似可以用细铁丝顶端弯一个小圈，烧红晾凉了后）刮取鱼肠道内壁和肠道食物糜，加入盛有灭菌后的5ml无菌水的试管中，震荡摇匀后制成菌悬液，静置3min后用无菌吸管吸取上清液，点在培养基平板上，用灼烧过后晾凉了的"了"字形细玻璃棒涂布在平板上，以上操作必须全部在超净工作台内酒精灯火焰上方，如果没有条件，那就在相对干净的塑料箱内操作，使用之前要用75%的酒精消毒灭菌，涂布完毕后，将平板正放在37度无氧条件下的培养箱内，因为是肠道菌都是厌氧的细菌。。一般过夜就可以看到菌落长出，应及时转接出去，并做好标记，注意无菌操作。。。。。
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2楼2012-03-03 01:39:23
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luocongqiang

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by jiyannangxj at 2012-03-03 01:39:23:
我做的就是微生物，你得先取鱼肠道一节，用接种环（类似可以用细铁丝顶端弯一个小圈，烧红晾凉了后）刮取鱼肠道内壁和肠道食物糜，加入盛有灭菌后的5ml无菌水的试管中，震荡摇匀后制成菌悬液，静置3min后用无菌吸 ...

谢谢啊，我取材料后可能做PCR-DGGE跑胶，感觉怎么从肠道中取材料是一直困惑我的地方，谢谢你的指点
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3楼2012-03-03 09:39:55
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jiyannangxj

至尊木虫 (著名写手)

美女搞科研
引用回帖:
3楼: Originally posted by luocongqiang at 2012-03-03 09:39:55:
谢谢啊，我取材料后可能做PCR-DGGE跑胶，感觉怎么从肠道中取材料是一直困惑我的地方，谢谢你的指点

我晕啊，白写了这么多，我还以为你要培养呢 ，直接用微生物跑胶，可以吗，能得出什么结果啊。。。。
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4楼2012-03-03 09:51:39
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luocongqiang

铁虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by jiyannangxj at 2012-03-03 09:51:39:
我晕啊，白写了这么多，我还以为你要培养呢 ，直接用微生物跑胶，可以吗，能得出什么结果啊。。。。

哦 是这样的先从鱼肠道中提取微生物，在提取DNA，然后就是那一套过程了！一直感觉从肠道中把样品取出时最麻烦的，现在明白些了，谢谢你的指点啊
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5楼2012-03-03 13:30:04
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jiyannangxj

至尊木虫 (著名写手)

美女搞科研

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by luocongqiang at 2012-03-03 13:30:04:
哦 是这样的先从鱼肠道中提取微生物，在提取DNA，然后就是那一套过程了！一直感觉从肠道中把样品取出时最麻烦的，现在明白些了，谢谢你的指点啊

哦，这样啊，挑取那么点菌，DNA量不够吧，建议还是先培养出来，两三个平板就够了，这样再破坏细胞壁，提取微生物DNA，跑胶效果会好点吧……

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2012-03-03 14:34:46
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luocongqiang

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by jiyannangxj at 2012-03-03 14:34:46:
哦，这样啊，挑取那么点菌，DNA量不够吧，建议还是先培养出来，两三个平板就够了，这样再破坏细胞壁，提取微生物DNA，跑胶效果会好点吧……

哦 谢谢了啊
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7楼2012-03-03 16:25:06
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longage.gene

银虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by jiyannangxj at 2012-03-03 14:34:46:
哦，这样啊，挑取那么点菌，DNA量不够吧，建议还是先培养出来，两三个平板就够了，这样再破坏细胞壁，提取微生物DNA，跑胶效果会好点吧……

请问，肠道菌是单一菌种？不是的话，你培养后，肠道菌的复杂性会不会变成单一菌或少数几种菌？鱼类肠道我不太懂，如果是人的肠道的话，菌的种类是很多很多的。
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8楼2012-03-03 17:18:51
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luocongqiang

铁虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by longage.gene at 2012-03-03 17:18:51:
请问，肠道菌是单一菌种？不是的话，你培养后，肠道菌的复杂性会不会变成单一菌或少数几种菌？鱼类肠道我不太懂，如果是人的肠道的话，菌的种类是很多很多的。

呵呵 不是单一菌种，我也看过很多文献都说很多菌种室不可以体外培养的，我这个是要用PCR-DGGE做的
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9楼2012-03-03 19:13:46
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longage.gene

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by luocongqiang at 2012-03-03 19:13:46:
呵呵 不是单一菌种，我也看过很多文献都说很多菌种室不可以体外培养的，我这个是要用PCR-DGGE做的

所以我觉得你这个真不好做，或者说实验结果会与实际的有差距，但是发文章可能还可以。
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10楼2012-03-03 20:06:17
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