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luocongqiang

铁虫 (小有名气)

[求助] 本人要要做鱼类肠道微生物,但不知如何下手,请有经验的支招啊,本人无限感激

本人要要做鱼类肠道微生物,但不知如何下手,请有经验的支招啊,本人无限感激
首先不知道怎么从肠道中把样品提取出来,第二小弟要做dgge要提DNA不知道用什么方法体好呢,最好小弟对于PCR中用到的引物一点也不明白啊,是需要自己设计吗,还是通用的呀!

各位有什么号的方法,文献麻烦借鉴一下啊,小弟不吝感激之情
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jiyannangxj

至尊木虫 (著名写手)

美女搞科研

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
luocongqiang(金币+4): 2012-03-03 09:40:12
luocongqiang(金币+1): 2012-03-03 09:40:33
我做的就是微生物,你得先取鱼肠道一节,用接种环(类似可以用细铁丝顶端弯一个小圈,烧红晾凉了后)刮取鱼肠道内壁和肠道食物糜,加入盛有灭菌后的5ml无菌水的试管中,震荡摇匀后制成菌悬液,静置3min后用无菌吸管吸取上清液,点在培养基平板上,用灼烧过后晾凉了的"了"字形细玻璃棒涂布在平板上,以上操作必须全部在超净工作台内酒精灯火焰上方,如果没有条件,那就在相对干净的塑料箱内操作,使用之前要用75%的酒精消毒灭菌,涂布完毕后,将平板正放在37度无氧条件下的培养箱内,因为是肠道菌都是厌氧的细菌。。一般过夜就可以看到菌落长出,应及时转接出去,并做好标记,注意无菌操作。。。。。
2楼2012-03-03 01:39:23
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luocongqiang

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by jiyannangxj at 2012-03-03 01:39:23:
我做的就是微生物,你得先取鱼肠道一节,用接种环(类似可以用细铁丝顶端弯一个小圈,烧红晾凉了后)刮取鱼肠道内壁和肠道食物糜,加入盛有灭菌后的5ml无菌水的试管中,震荡摇匀后制成菌悬液,静置3min后用无菌吸 ...

谢谢啊,我取材料后可能做PCR-DGGE跑胶,感觉怎么从肠道中取材料是一直困惑我的地方,谢谢你的指点
3楼2012-03-03 09:39:55
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jiyannangxj

至尊木虫 (著名写手)

美女搞科研

引用回帖:
3楼: Originally posted by luocongqiang at 2012-03-03 09:39:55:
谢谢啊,我取材料后可能做PCR-DGGE跑胶,感觉怎么从肠道中取材料是一直困惑我的地方,谢谢你的指点

我晕啊,白写了这么多,我还以为你要培养呢 ,直接用微生物跑胶,可以吗,能得出什么结果啊。。。。
4楼2012-03-03 09:51:39
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luocongqiang

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by jiyannangxj at 2012-03-03 09:51:39:
我晕啊,白写了这么多,我还以为你要培养呢 ,直接用微生物跑胶,可以吗,能得出什么结果啊。。。。

哦 是这样的先从鱼肠道中提取微生物,在提取DNA,然后就是那一套过程了!一直感觉从肠道中把样品取出时最麻烦的,现在明白些了,谢谢你的指点啊
5楼2012-03-03 13:30:04
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jiyannangxj

至尊木虫 (著名写手)

美女搞科研

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by luocongqiang at 2012-03-03 13:30:04:
哦 是这样的先从鱼肠道中提取微生物,在提取DNA,然后就是那一套过程了!一直感觉从肠道中把样品取出时最麻烦的,现在明白些了,谢谢你的指点啊

哦,这样啊,挑取那么点菌,DNA量不够吧,建议还是先培养出来,两三个平板就够了,这样再破坏细胞壁,提取微生物DNA,跑胶效果会好点吧……

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
6楼2012-03-03 14:34:46
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luocongqiang

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by jiyannangxj at 2012-03-03 14:34:46:
哦,这样啊,挑取那么点菌,DNA量不够吧,建议还是先培养出来,两三个平板就够了,这样再破坏细胞壁,提取微生物DNA,跑胶效果会好点吧……

哦 谢谢了啊
7楼2012-03-03 16:25:06
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longage.gene

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by jiyannangxj at 2012-03-03 14:34:46:
哦,这样啊,挑取那么点菌,DNA量不够吧,建议还是先培养出来,两三个平板就够了,这样再破坏细胞壁,提取微生物DNA,跑胶效果会好点吧……

请问,肠道菌是单一菌种?不是的话,你培养后,肠道菌的复杂性会不会变成单一菌或少数几种菌?鱼类肠道我不太懂,如果是人的肠道的话,菌的种类是很多很多的。
8楼2012-03-03 17:18:51
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luocongqiang

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by longage.gene at 2012-03-03 17:18:51:
请问,肠道菌是单一菌种?不是的话,你培养后,肠道菌的复杂性会不会变成单一菌或少数几种菌?鱼类肠道我不太懂,如果是人的肠道的话,菌的种类是很多很多的。

呵呵 不是单一菌种,我也看过很多文献都说很多菌种室不可以体外培养的,我这个是要用PCR-DGGE做的
9楼2012-03-03 19:13:46
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longage.gene

银虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by luocongqiang at 2012-03-03 19:13:46:
呵呵 不是单一菌种,我也看过很多文献都说很多菌种室不可以体外培养的,我这个是要用PCR-DGGE做的

所以我觉得你这个真不好做,或者说实验结果会与实际的有差距,但是发文章可能还可以。
10楼2012-03-03 20:06:17
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