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luocongqiang

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[求助] 本人要要做鱼类肠道微生物，但不知如何下手，请有经验的支招啊，本人无限感激

本人要要做鱼类肠道微生物，但不知如何下手，请有经验的支招啊，本人无限感激
首先不知道怎么从肠道中把样品提取出来，第二小弟要做dgge要提DNA不知道用什么方法体好呢，最好小弟对于PCR中用到的引物一点也不明白啊，是需要自己设计吗，还是通用的呀！

各位有什么号的方法，文献麻烦借鉴一下啊，小弟不吝感激之情

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1楼2012-03-02 16:24:03

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jiyannangxj

至尊木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

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luocongqiang(金币+4): 2012-03-03 09:40:12
luocongqiang(金币+1): 2012-03-03 09:40:33

我做的就是微生物，你得先取鱼肠道一节，用接种环（类似可以用细铁丝顶端弯一个小圈，烧红晾凉了后）刮取鱼肠道内壁和肠道食物糜，加入盛有灭菌后的5ml无菌水的试管中，震荡摇匀后制成菌悬液，静置3min后用无菌吸管吸取上清液，点在培养基平板上，用灼烧过后晾凉了的"了"字形细玻璃棒涂布在平板上，以上操作必须全部在超净工作台内酒精灯火焰上方，如果没有条件，那就在相对干净的塑料箱内操作，使用之前要用75%的酒精消毒灭菌，涂布完毕后，将平板正放在37度无氧条件下的培养箱内，因为是肠道菌都是厌氧的细菌。。一般过夜就可以看到菌落长出，应及时转接出去，并做好标记，注意无菌操作。。。。。

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2楼2012-03-03 01:39:23

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luocongqiang

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引用回帖:

楼: Originally posted by jiyannangxj at 2012-03-03 01:39:23:
我做的就是微生物，你得先取鱼肠道一节，用接种环（类似可以用细铁丝顶端弯一个小圈，烧红晾凉了后）刮取鱼肠道内壁和肠道食物糜，加入盛有灭菌后的5ml无菌水的试管中，震荡摇匀后制成菌悬液，静置3min后用无菌吸 ...

谢谢啊，我取材料后可能做PCR-DGGE跑胶，感觉怎么从肠道中取材料是一直困惑我的地方，谢谢你的指点

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3楼2012-03-03 09:39:55

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