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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于分子筛纯化蛋白的问题
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lxyyzz

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于分子筛纯化蛋白的问题

用Sephacryl S-200 HR分子筛纯化蛋白，柱子是自己装的，加样后不到10分钟就开始出峰，总柱体积大概为190ml3，60cm长的柱子，流速为1ml/min，按道理来说不是应该走一个外水体积以后才会有峰出现吗？还是柱子装的不好？有人遇到类似的问题吗？
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1楼 2010-10-16 17:28:38
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happyharmony

铁虫 (初入文坛)
lxyyzz(金币+1):谢谢参与 2010-10-16 19:17:12
是不是大家一般说的穿过峰？
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2楼2010-10-16 18:43:58
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
lstt09nk(金币+1):感谢参与 2010-10-16 18:58:54
lxyyzz(金币+2):哎，峰都连成一片了。估计还是我自己装的问题。 2010-10-16 19:17:59
分子量太大的蛋白质是可以走外水的，你用蓝色葡聚糖试一下，看看它的条带是不是够狭窄锋利，就知道分离效果好不好了。同时看看在什么时间出峰，看看外水体积多大。我自己装的效果也不好。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2010-10-16 18:52:45
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)
lxyyzz(金币+1):谢谢参与 2010-10-16 21:18:18
自己装的柱效都很差啊
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4楼2010-10-16 19:31:40
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lily.8846

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我自己装柱子都装的很好啊，以前工程师说装柱时凝胶要很稀灌进去，但是这样很容易出现断层什么的，我后来用比较稠灌柱子，时间也节约了，柱子也会填的比较好，不会有断层
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5楼2012-04-12 12:21:11
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sxxuan

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我用的是Sephacryl S-500 HR，大概15~20min左右出峰，估计是走1/3柱体积左右。
请问这系列的填料如何清洗和再生？我一般是用0.2M的NaOH清洗2个柱体积，然后用洗脱液重新平衡，这样可以不？总会担心洗不干净啊
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你的日子如何，你的力量也必如何！
6楼2012-09-13 15:23:44
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