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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】dna纯度太低。。。
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hhb7610076

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】dna纯度太低。。。 已有11人参与

提取蝗虫的dna OD260/OD280=1.02

     请问纯度不够可以用于pcr吗？
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不能承受生命之轻！
1楼 2010-10-14 10:52:44
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cyz20050505

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
DNA抽提出来以后，电泳检测在约20kb有目的条带，没什么降解拖带就行，稀释不稀释都行，根据PCR反应体积加0.5ul-2ulDNA模板。根本不用检测浓度，纯度啥的，要纯度就用试剂盒提。
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26楼2010-10-18 18:50:55
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普通回帖

ben1147

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以，不要加太多模板
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2楼2010-10-14 10:54:14
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hhb7610076

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-10-14 10:54:14:
可以，不要加太多模板

谢谢，但是因为纯度低，用分光光度法测不出来浓度，不知道体系里该加多少模板。。。
请问还有什么方法能测吗？
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不能承受生命之轻！
3楼2010-10-14 11:02:20
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
做PCR时设置浓度梯度就是了，看哪个效果好啊。
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4楼2010-10-14 11:32:38
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feng__

金虫 (著名写手)

雾~蝶
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
小抽的DNA都可以做PCR啊   量可以自己摸索下   还是很好P的
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会不会偶尔也会想起我....
5楼2010-10-14 11:38:41
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+2):比较实际 2010-10-14 16:24:11
引用回帖:
Originally posted by hhb7610076 at 2010-10-14 11:02:20:


谢谢，但是因为纯度低，用分光光度法测不出来浓度，不知道体系里该加多少模板。。。
请问还有什么方法能测吗？

跑电泳么，跟marker比一比，大概估测一下浓度

如果确实纯度比较低，里面盐离子什么的比较多，尽量加少一点，防止干扰PCR反应。具体加入DNA的量反倒不重要
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6楼2010-10-14 11:55:11
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taigongzaici

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
要看实验目的，纯度低可以满足一般的PCR
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7楼2010-10-14 21:36:22
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hhb7610076

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 王会征 at 2010-10-14 11:32:38:
做PCR时设置浓度梯度就是了，看哪个效果好啊。

但是定量不了，不好配体系。。。
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不能承受生命之轻！
8楼2010-10-15 16:50:05
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hhb7610076

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by feng__ at 2010-10-14 11:38:41:
小抽的DNA都可以做PCR啊   量可以自己摸索下   还是很好P的

只能先做做试试了。。。
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不能承受生命之轻！
9楼2010-10-15 16:50:55
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hhb7610076

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-10-14 11:55:11:


跑电泳么，跟marker比一比，大概估测一下浓度

如果确实纯度比较低，里面盐离子什么的比较多，尽量加少一点，防止干扰PCR反应。具体加入DNA的量反倒不重要

谢谢，电泳跑了，跟marker差不多，但是纯度不够那个条带会不会受影响？

[ Last edited by hhb7610076 on 2010-10-15 at 16:56 ]
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不能承受生命之轻！
10楼2010-10-15 16:51:55
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