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ywg8808

铁虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助】头孢噻肟无菌方法验证已有2人参与

我想向各位大侠请教一下头孢噻肟钠的无菌方法验证的相关内容,我用不同的方法做了五次,供试品加金黄色葡萄球菌和大肠杆菌这两管不长菌,但是阳性对照管均长菌，其他供试品的阳性也长菌。现把我做的方法写出来，请大侠指点下哪里有问题，并能提供改进方法。
第一次采用的方法是20g头孢噻肟钠，用适量0.9%无菌氯化钠溶解，转移至160ml 0.9%氯化钠溶液中，混匀，按薄膜过滤法过滤，用800ml0.1%蛋白胨水溶液冲洗，每次冲洗量为100ml，冲洗完后加100ml的硫乙醇酸盐流体培养基，再加入1ml青霉素酶及菌液。（其中金黄色葡萄球菌（10-16）、大肠埃希菌（10-10）、生孢梭菌（10-6）、枯草芽孢杆菌（10-6）、白色念珠菌（10-10）碟子计数均大于50cfu）
第二次采用的方法是其他条件不变，加2ml青霉素酶，只做金葡和大肠
第三次采用的方法是其他条件不变，每次冲洗量为50ml，加2ml酶，只做金葡和大肠
第四次采用的方法是其他条件不变，每次冲洗量为100ml，加3ml酶，只做金葡和大肠
第五次采用的方法是其他条件不变，每次冲洗量为100ml，加4ml酶，只做金葡和大肠（金黄色葡萄球菌终于长出来了，但是大肠还是纹丝不动）
根据五次采用的方法，初步怀疑原因有下：
  一、样品量过大，取样量是根据我们厂生产的最大规格（2.0g/瓶），根据药典要求每批次取30瓶作为供试品，平均下来每管就是20g
  二、菌液浓度过稀，但是必须加小于100cfu的菌液
  三、酶的活性不够，我们用的酶是中检所生产的，批号为20100621

   经过前五次的试验，现在改为10g头孢噻肟钠，用适量0.9%无菌氯化钠溶解，转移至160ml 0.9%氯化钠溶液中，混匀，按薄膜过滤法过滤，用800ml0.1%蛋白胨水溶液冲洗，每次冲洗量为100ml，冲洗完后加100ml的硫乙醇酸盐流体培养基，再加入1ml青霉素酶及菌液。
   我采用两种加酶方法，一种是加1ml，另一种是加2ml酶，培养一天后发现大肠还是未长，金黄色葡萄球菌还不是很明显，等几个小时后在看结果。
希望高手能从中发现破绽并能一举突破，小弟不胜感激！！！！1

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