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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】重叠PCR的问题???
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xulanzzz

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】重叠PCR的问题??? 已有1人参与

大家好，这个是重叠PCR的步骤：请问里面的第5）步的延伸都需要添加什么？？
1)  以引物A/B进行PCR1；
2)  以引物C/D进行PCR2；
3)  引物B/C中引入了需要的限制性位点；
4)  混合二者PCR产物，混合以前最好回收一下；
5)  进行PCR延伸反应，1-5个循环即可。
6)  以延伸反应的产物为模板，以A/D为引物进行PCR；
7)  产物即为所需最终产物。

[ Last edited by xulanzzz on 2010-10-11 at 13:05 ]
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DOBEST
1楼 2010-10-11 10:33:41
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jasco

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by xulanzzz at 2010-10-11 11:50:36:

这个本来下面有一个图说明，但是图粘贴不上。请问延伸的反应要不要添加聚合酶？

加！
7楼2010-10-11 13:37:43
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jasco

木虫 (正式写手)
互为模板延伸，但是“只有右面”就不懂指哪个
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2楼2010-10-11 10:50:31
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hongchenlyan

金虫 (小有名气)
我曾经做过，是删除一段序列，设计B/C引物基本一致，跨所要删的序列，1）2）步骤一致，然后分别回收产物，大致等量混合后，以A/D为引物进行PCR获得终产物。
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3楼2010-10-11 11:12:48
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xulanzzz

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-10-11 10:50:31:
互为模板延伸，但是“只有右面”就不懂指哪个

这个本来下面有一个图说明，但是图粘贴不上。请问延伸的反应要不要添加聚合酶？
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DOBEST
4楼2010-10-11 11:50:36
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