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xulanzzz

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】重叠PCR的问题???已有1人参与

大家好,这个是重叠PCR的步骤:请问里面的第5)步的延伸都需要添加什么??
1)  以引物A/B进行PCR1;
2)  以引物C/D进行PCR2;
3)  引物B/C中引入了需要的限制性位点;
4)  混合二者PCR产物,混合以前最好回收一下;
5)  进行PCR延伸反应,1-5个循环即可。
6)  以延伸反应的产物为模板,以A/D为引物进行PCR;
7)  产物即为所需最终产物。

[ Last edited by xulanzzz on 2010-10-11 at 13:05 ]
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DOBEST
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jasco

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by xulanzzz at 2010-10-11 11:50:36:

这个本来下面有一个图说明,但是图粘贴不上。请问延伸的反应要不要添加聚合酶?

加!
7楼2010-10-11 13:37:43
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jasco

木虫 (正式写手)

互为模板延伸,但是“只有右面”就不懂指哪个
2楼2010-10-11 10:50:31
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hongchenlyan

金虫 (小有名气)

我曾经做过,是删除一段序列,设计B/C引物基本一致,跨所要删的序列,1)2)步骤一致,然后分别回收产物,大致等量混合后,以A/D为引物进行PCR获得终产物。
3楼2010-10-11 11:12:48
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xulanzzz

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-10-11 10:50:31:
互为模板延伸,但是“只有右面”就不懂指哪个

这个本来下面有一个图说明,但是图粘贴不上。请问延伸的反应要不要添加聚合酶?
DOBEST
4楼2010-10-11 11:50:36
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